基于克隆技術構建基因修飾兔模型的研究.pdf

1、隨著越來越多的基因組序列相繼被識別，人類對生物本質的認識已經發(fā)生了重大的變化，如何利用這些基因信息來研究其功能呢？在基礎研究中，比較常用的方法是利用轉基因技術和基因打靶技術構建動物模型來進行相關的研究。在生產基因修飾的大動物的過程中，基于克隆技術的轉基因動物和基因打靶動物模型的制作在醫(yī)學及基礎科學等領域的研究中處于舉足輕重的地位。
　　目前家兔已經被廣泛用作模擬研究人類相關疾病的實驗動物模型，包括心血管疾病、代謝疾病、呼吸系統(tǒng)疾病

2、和各種類型的癌癥疾病。兔具有一些優(yōu)于其他實驗動物的特性:其體型能夠允許一些不能在小鼠和大鼠身上實施的手術得以實現，而且它們系統(tǒng)發(fā)生上更接近人類。此外，在人類生殖領域研究中，一些基因的高度保守性顯示兔將是研究人類胚胎植入前發(fā)育的一個有價值的動物模型，而且其胚胎和胎兒-胎盤發(fā)育與人類相似。然而，目前僅有數量有限的轉基因兔和自然突變兔模型可供研究，因此通過基因改造獲得實驗動物模型兔具有非常廣闊的應用前景和理論價值。
　　本研究以家兔克隆

3、技術為基礎構建基因修飾兔模型，分兩部分內容:
　?。ㄒ唬┪覀儤嫿送肙ct4啟動子驅動EGFP表達的一個報告質粒(prOG)，并通過體細胞轉染和核移植技術(SCNT)獲得了prOG轉基因克隆兔。prOG轉基因胚胎和prOG轉基因兔F1代胚胎均能觀察到綠色熒光的表達，而且在27 dpc兔胎兒生殖器官也有綠色熒光的表達。之后，我們分別建立培養(yǎng)了prOG-SSCs和prOG-ES細胞系，觀察到綠色熒光的表達;并且發(fā)現了兔ES細胞的異質性

4、，分離兩種細胞后進行了初步的表觀遺傳分析。prOG轉基因兔作為研究兔多能性細胞來源和維持的一個新模型，為兔多能性細胞的相關研究提供了便利，同時也可能會進一步促進兔胚胎發(fā)生過程中的機理研究。
　?。ǘ┰谶@部分研究中，我們闡述了通過重組型腺相關病毒(rAAV)介導的HPRT基因同源重組打靶克隆兔的制作過程。為了提高基因的靶向效率，我們采用了基因捕獲的設計策略。通過不同的設計策略，分別建立了雄性和雌性不同類型的基因打靶成纖維細胞系;將