無創(chuàng)肢體缺血預處理對兔缺血性室性心律失常的影響及機制研究.pdf

1、目的:研究無創(chuàng)肢體缺血預處理對兔缺血性室性心律失常的影響及其作用機制,為其臨床應用提供實驗性理論依據。方法:日本大耳白兔27只,體重(1.8±0.4)kg,雌雄不拘,隨機分至單純缺血對照組(Ctr,n=8)、無創(chuàng)肢體缺血預處理組(LIP,n=7)、LIP+格列本脲組(LG,n=6)和LIP+SB203580組(LSB,n=6)。動物麻醉后,經右頸外靜脈插入電極至右心室記錄心內膜MAP；針形電極插入四肢皮下記錄標準Ⅱ導聯ECG；經胸骨左緣

2、第4或第5肋間隙開1～2mm2小孔,插入接觸電極至心室外心包壁層稍加壓記錄心外膜MAP。Ctr組不作特殊處理,待ECG和心內、外膜MAP圖形穩(wěn)定后,靜脈注射垂體后葉素(2U/kg)造成心肌缺血背景,再靜脈注射腎上腺素(0.2ml/kg)誘發(fā)心律失常；同步記錄ECG及心內、外膜MAP,觀察心內、外膜MAP變化及與心律失常間的關系；LIP組:用充氣止血帶結扎兔雙后肢使之缺血5min,松開使之再灌注5min,重復4次,余同Ctr組；LG組:先

3、靜脈注射格列本脲(0.16mg/kg),30min后行與LIP組相同的處理；LSB組:先靜脈注射SB203580(0.1mg/kg),30min后行與LIP組相同的處理。用RM6280生物信號采集處理系統(tǒng)動態(tài)觀察ECG和心內外膜MAP的變化。實驗結束后,空氣栓塞處死動物,摘取心臟,部分用4％多聚甲醛固定做形態(tài)學觀察,部分存于-70℃冰箱待用。結果:①缺血前后,Ctr組心內膜APD90分別為(130.66±13.36)ms和(135.23

4、±10.24)ms,心外膜APD90分別為(132.56±16.27)ms和(141.90±16.37)ms；LIP組心內膜APD90分別為(122.47±13.94)ms和(130.26±17.12)ms,心外膜APD90分別為(124.16±9.72)ms和(148.02±12.78)ms；LG組心內膜APD90分別為(127.19±36.78)ms和(134.72±46.01)ms,心外膜APD90分別為(146.20±16.21

5、)ms和(160.78±22.73)ms；LSB組心內膜APD90分別為(100.88±13.36)ms和(104.56±28.46)ms,心外膜APD90分別為(105.77±18.59)ms和(104.10±20.69)ms。缺血后各組均出現室性心律失常,主要為室性早搏二聯律和三聯律。Ctr組有3例出現室性心動過速,未出現心室顫動,LIP、LG及LSB組均末出現室性心動過速及心室顫動。心律失常持續(xù)時間(s)分別為(231.54±15

6、.78),(167.61±16.13),(159.38±29.56)和(209.83±26.39)。②心肌組織中SOD活力(U/mgprot)分別為(263.78±61.51),(322.63±50.46),(280.56±37.01)和(314.52±44.72)；MDA含量(nmol/mgprot)分別為(14.01±6.23),(5.34±2.17),(6.25±2.57)和(5.94±2.13)；NO含量(μmol/gprot)

7、分別為(30.85±10.13),(242.17±48.84),(68.18±31.26)和(65.18±22.55)。③缺血后,各組心內膜APD90均延長,LIP及LSB組心內膜APD90短于Ctr組(P<0.05)；缺血后Ctr、LIP及LG組心外膜APD90延長而LSB組APD90縮短,LSB組心外膜APD90短于Ctr及LIP組(P<0.05)。LIP及LG組心律失常持續(xù)時間短于Ctr組(P<0.05)。LIP組SOD活力高于C

8、tr組(P<0.05),LG及LSB組SOD活力與Ctr及LIP組相比無差異(P>0.05)；LIP、LG及LSB組MDA含量均低于Ctr組(P<0.01),LG及LSB組MDA含量與LIP組相比無差異(P>0.05)；LIP組NO含量高于Ctr組(P<0.01),LG及LSB組NO含量低于LIP組(P<0.01),LG及LSB組NO含量與Ctr組相比無差異(P>0.05)。④HSP70 mRNA的相對表達量分別為(3.04±0.20)

9、,(3.14±0.20),(2.65±0.18)和(2.61±0.31),LIP組HSP70 mRNA相對表達量與Ctr組相比無差異(P>0.05),而LG及LSB組HSP70 mRNA的相對表達量均低于Ctr及LIP組(P>0.01)；COX-2 mRNA的相對表達量分別為(1.36±0.16),(1.61±0.22),(1.47±0.19)和(1.14±0.09),LIP組COX-2 mRNA相對表達量高于Ctr組(P<0.05),

10、LSB組COX-2 mRNA相對表達量低于Ctr及LIP組(P<0.05),LG組COX-2 mRNA相對表達量與Ctr及LIP組相比均無差異(P>0.05)；iNOS mRNA的相對表達量分別為(1.32±0.08),(1.75±0.12),(1.40±0.14)和(1.34±0.07),LIP組iNOS mRNA的相對表達量高于Ctr組(P<0.01),LG及LSB組iNOSmRNA的相對表達量低于LIP組(P<0.01)；YNFα

11、 mRNA的相對表達量分別為(0.57±0.03),(0.38±0.03),(0.55±0.06)和(0.54±0.04),LIP組TNFα mRNA的相對表達量低于Ctr組(P<0.01),LG及LSB組TNFα mRNA的相對表達量高于LIP組(P<0.01)；NF-κB mRNA的相對表達量分別為(0.62±0.05),(0.51±0.03),(0.59±0.04)和(0.60±0.04),LIP組NF-κB mRNA的相對表達量

12、低于Ctr組(P<0.01),LG及LSB組NF-κB mRNA的相對表達量高于LIP組(P<0.01)。⑤p-p38MAPK蛋白陽性表達量在Ctr組為(0.08±0.02),LIP組為(0.15±0.03),LG組為(0.12±0.02),LIP及LG組p-p38MAPK蛋白表達均高于Ctr組(P<0.05),而p-p38MAPK蛋白在LSB組中的陽性表達量為(0.05±0.02),與Ctr、LIP及LG組相比均減少(P<0.05)。

13、結論:1.LIP具有減輕心肌氧化損傷和改善心肌供血,進而增強兔缺血心肌電穩(wěn)定性的作用；2.p38MAPK是LIP增強缺血心肌電穩(wěn)定性的重要途徑,KATP則在抗氧化和改善心肌供血等方面發(fā)揮了作用；3.LIP對I/R心肌起保護作用可能的機制和信號轉導通路是,首先經“觸發(fā)物質”啟動心肌保護,然后通過“中介物質”啟動信號轉導,激活下游絲裂素活化蛋白激酶(MAPK)系統(tǒng),進而引起信號的傳遞和放大,并活化核轉錄因子及產生“效應子”最終發(fā)揮心肌保護作