EGR-1誘騙寡核苷酸下調(diào)MIF表達(dá)抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞遷移.pdf

1、目的：
　　 通過(guò)向原代培養(yǎng)的大鼠動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)中轉(zhuǎn)染早期反應(yīng)生長(zhǎng)因子-1(early growth response fator,Egr-1)特異性誘騙寡核苷酸(decoy oligonucleotides,decoy ODN)和雜碼寡核苷酸(oligonuleotides SCR),檢測(cè)Egr-1、巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子(macrophagemigrat

2、ion inhibitory factor,MIF)mRNA和蛋白表達(dá)變化,以及血管平滑肌遷移情況,探討Egr-1和MIF關(guān)系以及二者對(duì)體外平滑肌細(xì)胞遷移的影響。
　　 方法：
　　 通過(guò)組織塊貼壁法原代培養(yǎng)大鼠動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞,并通過(guò)非脂質(zhì)體攜帶針對(duì)Egr-1的誘騙寡核苷酸進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)染,用RT-PCR、S-P免疫細(xì)胞化學(xué)染色法檢測(cè)不同時(shí)間點(diǎn)Egr-1和MIF表達(dá)情況,進(jìn)行MetaMorphan圖像分析。同時(shí)利用劃傷愈

3、復(fù)法檢測(cè)VSMC遷移能力。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS11.5進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,各組間比較應(yīng)用單因素方差分析,p＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 成功進(jìn)行原代VSMC培養(yǎng),經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)及S-P免疫組化鑒定培養(yǎng)細(xì)胞為高純度的VMSC。RT-PCR結(jié)果顯示:Egr-1誘騙寡核苷酸轉(zhuǎn)然后,Egr-1 mRNA表達(dá)隨著時(shí)間逐漸減少;MIF mRNA表達(dá)在48h達(dá)到高峰。同一時(shí)間點(diǎn),誘騙組Egr-1及

4、MIF mRNA表達(dá)均顯著減少,與對(duì)照組、SCR組相比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。S-P法免疫組化結(jié)果顯示:對(duì)照組及SCR組VSMC Egr-1、MIF蛋白均有表達(dá),兩組之間無(wú)明顯差異(p＞0.05),Egr-1誘騙組Egr-1、MIF蛋白表達(dá)顯著低于上述兩組,且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。同時(shí)細(xì)胞劃傷愈復(fù)法結(jié)果顯示:與對(duì)照組姐SCR組比較,誘騙組中VSMC的遷移距離明顯減少(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：