抗癌復方硫酸長春新堿脂質體給藥系統(tǒng)研究.pdf

1、“癌癥”是臨床上的一種常見病，亦是對患者生命安全威脅最大的一種惡性疾病。目前，雖然有了手術療法、放射療法、化學療法、生物醫(yī)學療法等治療手段，但癌癥的防治遠遠不能達到人類健康的要求，早日攻克癌癥亦是當今人類的一種迫切希望。為了攻克癌癥，醫(yī)藥工作者進行著不懈的努力，不斷提出新的治療理論和治療方法，早期化療通常只用一種抗癌藥物，但易產生耐藥性，且治療效果不好，目前臨床化療多采用聯合化療，即兩種抗癌藥物甚至多種抗癌藥物聯合使用，聯合化療與僅使用

2、單一抗癌藥物相比，有以下幾個特點：可增加對癌細胞的細胞毒性；攻擊癌細胞的不同生物化學靶點；具有不同的抗癌作用機理，產生加和(或)協(xié)同作用；可同時作用于不同生長周期的癌細胞；克服癌細胞的耐藥性；聯合化療對正常細胞的毒性不產生疊加毒性。因此，臨床廣泛采用聯合化療治療癌癥。 鹽酸米托蒽醌(MTO)、硫酸長春新堿(VCR)是臨床常用的兩種化療藥物，聯合使用產生加和協(xié)同的抗癌作用，是臨床治療晚期乳腺癌，急性淋巴性白血病、非何杰金淋巴瘤、骨

3、髓瘤的常用聯合化療方案，療效顯著。 木課題首次提出將兩種抗癌藥物MTO和VCR同時包結于脂質體納米粒給藥載體的構想，利用脂質體納米粒給藥系統(tǒng)的獨特優(yōu)勢，用于癌癥治療。 為研究藥物的包封率、泄露率、體外釋藥速率奠定基礎，建立了同時定量測定兩種藥物濃度的HPLC法，方法準確、新穎、簡便、重現性好。 根據MTO和VCR的理化性質，以注射用大豆卵磷脂為材料，以體外釋藥半衰期(T1/2)和泄露率為指標，確定MTO-VCR-

4、LP的制備工藝，分別以一級動力學方程、Higuchi方程、Weibull方程對MTO-VCR-LP-1、MTO-VCR-LP-2以及對照MTO和VCR水溶液(MTO-VCR-Soln)中VCR體外釋藥數據進行擬合，MTO-VCR-LP-1中VCR的釋藥曲線以Weibull方程擬合效果最好，T1/2為6.82h，MTO-VCR-LP-2中VCR的釋藥曲線以Higuchi方程擬合效果最好，T1/2為2.22h，MTO-VCR-Soln中VC

5、R的釋藥曲線以Higuchi方程擬合效果最好，T1/2為1.70h。泄露實驗結果為MTO-VCR-LP-1中MTO在51d內幾乎無泄露；VCR在11d內幾乎無泄露，但在33d時滲漏率達28.85％，在51d時滲漏率達79.82％；MTO-VCR-LP-2中MTO在5d時滲漏率為11.88％，VCR在5d時滲漏率達95.35％。根據體外釋藥半衰期(T1/2)和泄露率結果，確定了復方硫酸長春新堿脂質體(MTO-VCR-LP-1)的制備工藝。

6、采用逆向蒸發(fā)法合并pH梯度法制備MTO-VCR-LP，MTO-VCR-LP的平均粒徑為76.61nm，Z-電位為-30.97mv，經SephadexG-50葡聚糖凝膠柱分離，HPLC法測定MTO的平均包封率達99.53％±0.34％(n=3)，載藥量為2.5％±0.10％(n=3)；VCR的平均包封率達95.77％±2.70％(n=3)，載藥量為0.38％±0.05％(n=3)。由于MTO-VCR-LP在33d時滲漏率達28.85％，在

7、51d時滲漏率達79.82％，故將其進行冷凍干燥，篩選出適宜的凍干劑為15％的蔗糖，所制備的MTO-VCR-LP凍干均勻、疏松，具有良好的再分散性。 為測定體內生物樣品中MTO和VCR的濃度，采用同一流動相，在不同波長處，HPLC法分別測定體內生物樣品中MTO和VCR的濃度，方法準確、新穎、簡便、重現性好。 為了考察MTO-VCR-LP的體內分布特性，進行了小鼠尾靜脈注射MTO-VCR-LP和MTO-VCR-Soln的體

8、內分布實驗研究，從動力學參數可以看出，血漿中MTO-VCR-LP中MTO的AUC是MTO-VCR-Soln的40.62倍，t1/2B是MTO原藥的432倍；心、肝、脾、肺、腎中MTO-VCR-LP中MTO的AUC分別是MTO-VCR-Soln中的0.72、2.73、1.79、0.48、0.47倍；血漿中MTO-VCR-LP中VCR的AUC是MTO-VCR-Soln中2.78倍，t1/2(Ke)是VCR原藥的1.14倍，心、肝、脾、肺、腎

9、中MTO-VCR-LP中MTO的AUC分別是MTO-VCR-Soln中的0.57、0.87、0.66、0.47和0.67倍。結果證實MTO-VCR-LP可改善原藥的體內分布特性。 為了考察MTO-VCR-LP是否可降低原藥的毒副作用，測定了MTO-VCR-LP和MTO-VCR-Soln的小鼠半數致死量(LD50)。MTO-VCR-LP的LD50為4.2mg·kg-1(95％可信限為2.9235～5.9428)。游離藥物的LD50

10、為2.7mg·kg-1(95％可信限為0.9798～7.4398)。初步證實MTO-VCR-LP降低了原藥的毒副作用。 為了進一步考察MTO-VCR-LP對荷人乳腺癌MCF-7裸鼠腫瘤的抑瘤效果和對用藥裸鼠的毒理作用，進行荷瘤裸鼠抑瘤率的測定，同時進行了毒理學研究。藥效學實驗中，在Blab/c裸鼠的頸背部皮下接種人乳腺癌MCF-7細胞，尾靜脈分別注入MTO-VCR-LP、MTO-VCR-Soln、MTO脂質體(MTO-LP)、M

11、TO溶液(MTO-Soln)、VCR脂質體(VCR-LP)、VCR溶液(VCR-Soln)和生理鹽水。MTO-VCR-LP、MTO-VCR-Soln、MTO-LP、MTO-Soln、VCR-LP、VCR-Soln組的抑瘤率分別為67.13％、67.75％、38.26％、42.16％、49.48％和34.74％。證實兩藥同時使用抗癌效果優(yōu)于單一藥物。在毒理學研究中，觀察了藥物對給藥局部的刺激性，進行常規(guī)脊髓計數等研究，實驗中發(fā)現給予游離藥

12、物組(MTO-VCR-Soln、MTO-Soln和VCR-Soln)的裸鼠尾部潰爛，而給予脂質體組(MTO-VCR-LP、MTO-LP、和VCR-LP)裸鼠尾部基本完好，證實脂質體作為藥物載體可減少藥物對給藥局部的刺激和損傷。MTO的副作用主要有骨髓抑制，引起白細胞和血小板減少，此為劑量限制性毒性。VCR的副作用主要有神經系統(tǒng)毒性和骨髓抑制，MTO和VCR的副作用均有骨髓抑制，且有研究證實，粒徑小于100nm的納米粒具有骨髓靶向。因此，

13、進行常規(guī)骨髓計數實驗，每組隨即選取3裸鼠做常規(guī)骨髓計數測定，結果顯示，MTO-VCR-Soln組3張骨髓涂片有兩張未檢測到原始粒，說明骨髓增生減低，且巨核細胞數分別為18個和5個，為所檢測21張涂片中最低，說明此實驗組裸鼠骨髓增生受抑制。其余6組的脊髓涂片，常規(guī)脊髓計數結果均表明骨髓增生極度活躍或明顯活躍，表明MTO-VCR-LP可降低游離藥物(MTO-VCR-Soln)對骨髓的抑制作用。按預定時間稱體重，繪制裸鼠體重變化曲線。注射脂質

14、體組裸鼠體重的增加幅度高于相對應的游離藥物組。說明以平均體重為考察指標，三種注射用脂質體的毒性低于相對應的游離藥物。 綜上所述，本課題在國際上首次提出將兩種抗癌藥物同時包結在脂質體中的構想，以體外釋藥速率作為指標，確定了制備工藝，成功制備了高包封率，粒徑小的MTO-VCR-LP。建立了同時定量測定兩種藥物濃度的HPLC法以及體內生物樣品測定的HPLC法。對比研究了MTO-VCR-LP與MTO-VCR-Soln體外釋藥規(guī)律，進而研

15、究了小鼠體內分布規(guī)律，測定了MTO-VCR-LP與MTO-VCR-Soln的LD50。在BALB/c-nu裸鼠上建立人乳腺癌MCF-7異位模型，進行腫瘤生長曲線和抑瘤率的測定等藥效學研究，進行了骨髓常規(guī)計數實驗，以探明藥物對骨髓的增生是否有抑制作用。結果證實MTO-VCR-LP可改善藥物的體內分布，增強了藥物的抗癌效果，提高藥物在血液中的濃度、延長藥物在血液中的循環(huán)時間，具有長循環(huán)的特性，同時降低藥物在心、腎等內臟器官的藥物濃度，降低了