基于新型納米復合物修飾的前列腺特異性抗原免疫傳感器的研究.pdf

1、由于生物傳感器具有選擇性好,靈敏度高,分析速度快,操作簡易,價格低廉等優(yōu)點,甚至可以實時在線檢測及活體分析,因此成為當前的研究熱點之一。目前,基于在電極上直接電子轉移的第三代電化學生物傳感器是當前生物傳感器的研究熱點,而納米材料所具有的獨特物理化學性質為第三代電化學生物傳感器的構建提供了一條嶄新的途徑。利用納米材料比表面積大的特點及良好的生物兼容性,增大了固定在電極上的抗體量,并使抗體保持良好的生物活性,從而提高了傳感器的靈敏度。因此如

2、何將多種納米復合物及顆粒有效地固定在電極表面,并保持其協(xié)同增加電子傳遞的能力是生物傳感器研究和開發(fā)中最為重要的環(huán)節(jié)。
　　 目的：
　　 建立靈敏、特異的基于納米復合物及顆粒修飾PSA電流型免疫傳感器,優(yōu)化影響電子傳遞速率的實驗條件,并進行電化學特性表征研究。同時與現(xiàn)有檢測前列腺特異性抗原的化學發(fā)光法比較,分析其用于臨床檢測前列腺特異性抗原(PSA)的可行性及主要優(yōu)勢與不足。
　　 材料與方法
　　 1、

3、用丙酮、乙醇、雙蒸水超聲清洗氧化銦錫(ITO)。
　　 2、將多壁碳納米管(MWNT)置于30％硝酸中超聲4h以引入羧基,接著用雙蒸水清洗至中性,烘干。
　　 3、制備普魯士蘭.殼聚糖(CS-PB)納米復合物、納米金(Aunano)、普魯士蘭-納米金(Aunano-PB)納米復合物、氨基硅烷化-葡聚糖-四氧化三鐵(AEAPS-Dextran-Fe3O4)磁性納米復合物。
　　 4、用紫外分光光度計觀察CS-PB、

4、Aunano-PB、AEAPS-Dextran-Fe3O4特征吸收峰和透射電鏡觀察CS-PB、AEAPS-Dextrail-Fe3O4的形態(tài)和直徑,并用原子吸收分光光度計法測定AEAPS-Dextran-Fe3O4中鐵的含量,葸酮-硫酸法測定葡聚糖的含量。
　　 5、制備電流型免疫傳感器BSA/anti-PSA/Aunano/CS-PB/MWNT/DpAu/ITO和BSA/anti-PSA/Aunano/AEAPS-Dextra

5、n-Fe3O4/Aunano-PB/ITO。
　　 6、優(yōu)化實驗條件,在0.1 mol/L的PBS(pH=7.0)緩沖液中,用循環(huán)伏安法對制備的傳感器進行電化學表征,并觀察傳感器檢測的靈敏度、線性響應范圍等。
　　 7、做方法學實驗(干擾實驗、穩(wěn)定性、重復性、回收實驗和對比實驗)對傳感器的各項性能作出評價。
　　 結果：
　　 1、通過超聲清洗,得到干凈的ITO電極,備用。
　　 2、通過在30％

6、硝酸中超聲反應,使MWNT成功引入羧基。
　　 3、成功制備CS-PB納米復合物、Aunano、Aunano-PB納米復合物、AEAPS-Dextran-Fe3O4磁性納米復合物,并用紫外分光光度計和透射電鏡進行表征。
　　 4、通過實驗條件的優(yōu)化,初步制備出可以檢測PSA電流型免疫傳感器并建立相應的檢測方法。在最適條件下,傳感器可在10min完成檢測,與傳統(tǒng)的免疫傳感器相比,該傳感器檢測的靈敏度更高、線性范圍變寬,穩(wěn)定

7、性、重復性、回收率等較好。
　　 5、構建的新型納米復合物修飾的電化學免疫傳感器與傳統(tǒng)的免疫分析方法做對比實驗,檢測臨床標本結果相近,說明所制備傳感器可用于臨床標本檢測。
　　 結論：
　　 應用納米復合物CS-PB、Aunano-PB、AEAPS-Dextran-Fe3O4和納米顆粒Aunano、MWNT通過自組裝、電聚合等技術,成功制備兩種免標記的PSA電流型免疫傳感器。初步證明該方法操作簡單、響應快、特異性