構(gòu)建新型電化學(xué)生物傳感器并應(yīng)用于細(xì)菌相關(guān)靶標(biāo)檢測.pdf

1、論文題目：構(gòu)建塹型電絲堂生物佳盛墨羞應(yīng)旦王細(xì)菌擔(dān)羞塑拯撿塑4答辯委員會主席：黃佳立麴握答辯委員會成員：渣菱趁盟宜旦黃連出重I嬰宜旦溫州醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文構(gòu)建新型電化學(xué)生物傳感器并應(yīng)用于細(xì)菌相關(guān)靶標(biāo)檢測摘要目的(1)利用四面體DNA納米結(jié)構(gòu)電化學(xué)基因傳感器對多種細(xì)菌進(jìn)行快速靈敏的通用及特異性檢測。(2)構(gòu)造一種新的光學(xué)和電化學(xué)方法，檢測生物小分子ATP。方法(1)提取細(xì)菌RNA，使用具有特異性或通用性的引物對cDNA進(jìn)行擴(kuò)增，構(gòu)造四面體

2、DNA電化學(xué)基因傳感器，利用特異性或通用探針對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行檢測。(2)在葡萄糖氧化酶法葡萄糖檢測體系中，加入以三磷酸腺苷和葡萄糖為底物的己糖激酶與葡萄糖氧化酶競爭消耗葡萄糖，葡萄糖信號的變化間接反映了溶液中ATP的含量。通過光學(xué)法和電化學(xué)方法對ATP進(jìn)行檢測。結(jié)果(1)基于16SrRNA的細(xì)菌檢測實驗：首先，我們以Ecoli為模型，對四面體DNA電化學(xué)基因傳感器的檢測靈敏度進(jìn)行了考察，結(jié)果表明，對合成DNA的檢測限可以達(dá)到100aM，對

3、不對稱PCR產(chǎn)物的檢測限為10fM。隨后，我們對9種細(xì)菌特異性擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳表征，結(jié)果表明，9種引物都能對其對應(yīng)菌種實現(xiàn)擴(kuò)增，而且對部分細(xì)菌達(dá)到了1CFU的檢測水平；對9種細(xì)菌通用擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳表征，結(jié)果顯示，9種細(xì)菌均有明顯擴(kuò)增產(chǎn)物。再者，我們考察了引物特異性，發(fā)現(xiàn)，在現(xiàn)有PCR條件下6種引物特異性不理想。最后，我們考察了四面體DNA電化學(xué)基因傳感器對除Ecoli外的其余8種細(xì)菌的合成DNA的檢測靈敏度