針刺蹺脈對失眠大鼠自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律及海馬內(nèi)5-HT1A、5-HT2A受體mRNA及蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、目的：借助PCPA失眠動(dòng)物模型，觀察正常和失眠SD大鼠自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律特征，以及針刺蹺脈后自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律的調(diào)整和變化；觀察失眠大鼠海馬內(nèi)5-HT1A、5-HT2A受體mRNA及蛋白表達(dá)的改變，評(píng)價(jià)針刺蹺脈對失眠大鼠的治療作用，以探討其內(nèi)在作用機(jī)制，為針刺蹺脈治療失眠提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法：1.將30只雄性SD大鼠馴化與L：D（12：12）光暗同步后，利用動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)自動(dòng)記錄及節(jié)律分析系統(tǒng)和美國CLOCKLAB數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng)，

2、自動(dòng)檢測和記錄自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律。然后將SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、針刺組，每組10只。2.對模型組和針刺組SD大鼠，運(yùn)用腹腔注射對氯苯丙氨酸（PCPA）混懸液的方法，復(fù)制失眠模型。觀察造模前后自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律的改變。3.造模后，每日早上8：00-10：00，對空白組及模型組給予抓放固定、不針刺干預(yù)，對針刺組給予抓放固定、針刺“申脈”、“照?！备深A(yù)，1次/天，20min/次，連續(xù)1周，觀察針刺蹺脈對自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律的影響。4.應(yīng)用實(shí)時(shí)

3、熒光定量PCR（RT-PCR）檢測海馬內(nèi)5-HT1A、5-HT2A受體mRNA的表達(dá)水平。5.應(yīng)用蛋白免疫印跡(Western Blot)檢測海馬內(nèi)5-HT1A、5-HT2A受體蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1.在L：D（12：12）馴化穩(wěn)定后，SD大鼠自發(fā)活動(dòng)均表現(xiàn)出近似晝夜節(jié)律。模型組與針刺組在PCPA造模后，表現(xiàn)出明顯的自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律紊亂，休息期活動(dòng)量明顯增加，與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。2.針刺蹺脈對針刺組大

4、鼠自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律具有調(diào)整作用，休息期活動(dòng)量減少，與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。3.造模后，模型組大鼠海馬中5-HT1A受體mRNA相對表達(dá)值減少，5-HT2A受體mRNA相對表達(dá)值增加，與空白組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。4.針刺治療后，針刺組大鼠海馬中5-HT1A受體mRNA相對表達(dá)值增加，5-HT2A受體mRNA相對表達(dá)值減少，與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。5.造模后，模型組大鼠海馬中5-HT1

5、A受體蛋白的表達(dá)水平減少，5-HT2A受體蛋白的表達(dá)水平增加，與空白組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。6.針刺治療后，針刺組大鼠海馬中5-HT1A受體蛋白的表達(dá)水平增加，5-HT2A受體蛋白的表達(dá)水平減少，與模型組比較，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05)。
　　結(jié)論：1.PCPA造模后失眠SD大鼠一般狀態(tài)表現(xiàn)異常，自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律紊亂，休息期活動(dòng)量明顯增加。2.針刺蹺脈可以使失眠SD大鼠自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律恢復(fù)其規(guī)律性，休息期活動(dòng)量相對