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文檔簡介
1、目的:借助PCPA失眠動(dòng)物模型,觀察正常和失眠SD大鼠自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律特征,以及針刺蹺脈后自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律的調(diào)整和變化;觀察失眠大鼠海馬內(nèi)5-HT1A、5-HT2A受體mRNA及蛋白表達(dá)的改變,評(píng)價(jià)針刺蹺脈對失眠大鼠的治療作用,以探討其內(nèi)在作用機(jī)制,為針刺蹺脈治療失眠提供科學(xué)依據(jù)。
方法:1.將30只雄性SD大鼠馴化與L:D(12:12)光暗同步后,利用動(dòng)物自發(fā)活動(dòng)自動(dòng)記錄及節(jié)律分析系統(tǒng)和美國CLOCKLAB數(shù)據(jù)采集分析系統(tǒng),
2、自動(dòng)檢測和記錄自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律。然后將SD大鼠隨機(jī)分為空白組、模型組、針刺組,每組10只。2.對模型組和針刺組SD大鼠,運(yùn)用腹腔注射對氯苯丙氨酸(PCPA)混懸液的方法,復(fù)制失眠模型。觀察造模前后自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律的改變。3.造模后,每日早上8:00-10:00,對空白組及模型組給予抓放固定、不針刺干預(yù),對針刺組給予抓放固定、針刺“申脈”、“照?!备深A(yù),1次/天,20min/次,連續(xù)1周,觀察針刺蹺脈對自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律的影響。4.應(yīng)用實(shí)時(shí)
3、熒光定量PCR(RT-PCR)檢測海馬內(nèi)5-HT1A、5-HT2A受體mRNA的表達(dá)水平。5.應(yīng)用蛋白免疫印跡(Western Blot)檢測海馬內(nèi)5-HT1A、5-HT2A受體蛋白的表達(dá)水平。
結(jié)果:1.在L:D(12:12)馴化穩(wěn)定后,SD大鼠自發(fā)活動(dòng)均表現(xiàn)出近似晝夜節(jié)律。模型組與針刺組在PCPA造模后,表現(xiàn)出明顯的自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律紊亂,休息期活動(dòng)量明顯增加,與空白組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2.針刺蹺脈對針刺組大
4、鼠自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律具有調(diào)整作用,休息期活動(dòng)量減少,與模型組比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。3.造模后,模型組大鼠海馬中5-HT1A受體mRNA相對表達(dá)值減少,5-HT2A受體mRNA相對表達(dá)值增加,與空白組比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.針刺治療后,針刺組大鼠海馬中5-HT1A受體mRNA相對表達(dá)值增加,5-HT2A受體mRNA相對表達(dá)值減少,與模型組比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。5.造模后,模型組大鼠海馬中5-HT1
5、A受體蛋白的表達(dá)水平減少,5-HT2A受體蛋白的表達(dá)水平增加,與空白組比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。6.針刺治療后,針刺組大鼠海馬中5-HT1A受體蛋白的表達(dá)水平增加,5-HT2A受體蛋白的表達(dá)水平減少,與模型組比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論:1.PCPA造模后失眠SD大鼠一般狀態(tài)表現(xiàn)異常,自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律紊亂,休息期活動(dòng)量明顯增加。2.針刺蹺脈可以使失眠SD大鼠自發(fā)活動(dòng)晝夜節(jié)律恢復(fù)其規(guī)律性,休息期活動(dòng)量相對
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