Ob-Rb在豬下丘腦、垂體和卵巢的定位及發(fā)育性變化.pdf

1、根據(jù)Genebank上發(fā)表的leptin長(zhǎng)型受體(Ob-Rb)mRNA基因序列，在其保守區(qū)設(shè)計(jì)一對(duì)引物。用Trizole法從小梅山豬和蘇姜豬(暫定名)的下丘腦、垂體、卵巢提取RNA，然后用RT-PCR進(jìn)行cRNA擴(kuò)增，獲得長(zhǎng)343bp的目的基因片段，運(yùn)用T-A克隆法，將此片段連接到pGEM-Easy T載體，通過(guò)藍(lán)白斑篩選、EcoR I酶切和序列測(cè)定等進(jìn)行重組質(zhì)粒鑒定。測(cè)序結(jié)果表明，獲得的目的基因片段與發(fā)表的序列同源性100％。

2、 用免疫組織化學(xué)的方法測(cè)定小梅山豬初生、30、60、70、90日齡，蘇姜豬初生、60、120、150、180日齡的下丘腦、垂體、卵巢內(nèi)Ob-Rb的分布及定位。結(jié)果顯示，Ob-Rb陽(yáng)性顆粒廣泛分布于下丘腦，尤其是弓狀核；垂體中Ob-Rb陽(yáng)性顆粒主要集中于垂體前葉細(xì)胞；卵巢中Ob-Rb陽(yáng)性顆粒出現(xiàn)在各級(jí)卵泡的顆粒細(xì)胞，而卵母細(xì)胞沒(méi)有陽(yáng)性顆粒。 用熒光定量法測(cè)定小梅山豬初生、30、60、70、90日齡，蘇姜豬初生、60、120、150

3、、180日齡的下丘腦、垂體、卵巢內(nèi)Ob-Rb mRNA的相對(duì)豐度變化。結(jié)果表明，相同豬種同一日齡不同組織Ob-Rb mRNA的表達(dá)量在卵巢中最高，下丘腦次之，垂體最少，但總體上，垂體和下丘腦之間差異不顯著；同一組織不同日齡的Ob-Rb mRNA在初生時(shí)都有較高的水平，之后逐漸下降，小梅山豬在60日齡時(shí)開(kāi)始上升，至70日齡時(shí)達(dá)峰值；蘇姜豬在120日齡時(shí)開(kāi)始上升，至150日齡時(shí)升至較高水平。而兩個(gè)品種的豬在出生時(shí)，小梅山豬各個(gè)部位Ob-Rb

4、 mRNA的表達(dá)量顯著高于蘇姜豬(P>0.01)。 酶聯(lián)免疫法測(cè)定5個(gè)時(shí)期血漿leptin水平，與Ob-Rb mRNA表達(dá)呈現(xiàn)出同步性變化，兩者顯著相關(guān)。放射免疫測(cè)定(RIA)五個(gè)階段血漿FSH、LH、E<,2>、P濃度變化規(guī)律。結(jié)果表明小梅山豬和蘇姜豬FSH、LH、E<,2>初生時(shí)濃度很高，且各自顯著高于小梅山豬(30、60日齡)、蘇姜豬(60、120日齡)激素水平(P<0.01)，之后迅速下降。至初情期時(shí)小梅山豬和蘇姜豬FS