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文檔簡介
1、補體系統(tǒng)(Complement system)是先天免疫的重要組成部分,通過經典途徑(classical pathway)、凝集素途徑(lectin pathway)和替代途徑(alternative pathways)激活補體,進而引起炎癥反應,發(fā)揮溶菌作用,溶解免疫復合物,殺傷細胞和調節(jié)免疫反應等重要作用。補體因子H(Complement factor H,CFH)是替代途徑中一種重要的調節(jié)因子,最初被認為是包含20個保守的補體蛋白
2、結構域(conservedcomplement protein domains,CCP)的糖蛋白。每個補體蛋白結構域,也稱作一致重復短序列(short consensus repeats,SCRs),都包含大概60個氨基酸,其中包括四個保守的半胱氨酸殘基,一個高度保守的色氨酸和一些相對保守的甘氨酸、脯氨酸和疏水性殘基。CFH蛋白可以通過結合C3b來抑制C3轉化酶的生成,同時也可以作為補體Ⅰ因子的輔因子加快C3b的降解,進而使其失活。
3、r> 文昌魚是脊索動物的祖先,是研究無脊椎動物過渡到脊椎動物的模式動物。形態(tài)學和分子生物學研究表明,文昌魚對闡明脊椎動物進化以及免疫系統(tǒng)起源起著重要作用。近年來,大量不同物種的基因組測序完成,特別是佛羅里達文昌魚(Branchiostoma floridae)全基因組測序的完成,以及比較免疫學的高速發(fā)展,使得人們越來越關注文昌魚免疫方面的研究,進一步了解脊椎動物進化以及免疫系統(tǒng)起源方面的問題。因此,本論文克隆得到了白氏文昌魚CFH基因
4、,并對其序列進行了生物信息學分析;同時檢測了文昌魚CFH基因在不同組織中的表達情況;并對白氏文昌魚CFH基因的抗菌免疫進行了初步研究。論文研究結果如下:
(1)克隆得到了白氏文昌魚CFH基因的全長,命名為AmphiCFH。其cDNA序列全長為1295bp,其中5'UTR為181bp,3'UTR為259bp,ORF長為855bp。
(2)生物信息學分析表明,白氏文昌魚CFH蛋白(AmphiCFH)由284個氨基酸組成,
5、包含兩個保守的補體蛋白結構域(CCP)和一個含24個氨基酸的信號肽,但沒有發(fā)現(xiàn)N-糖基化位點。其預測分子量為31.12KDa,理論等電點為4.29。
(3)白氏文昌魚CFH基因的進化地位位于無脊椎動物與脊椎動物之間,與經典分類法是一致的。
(4)通過原核表達實驗,在大腸桿菌中表達出了一條特異蛋白條帶,并且其分子量大小與預計的白氏文昌魚CFH蛋白理論分子量大小相符。
(5)解剖白氏文昌魚成體,分離出肌肉、脊索
6、、肝盲囊、鰓和腸五個組織,檢測發(fā)現(xiàn)AmphiCFH基因在五個組織中都有表達。表達量最高的是在脊索,此外肝盲囊和肌肉的表達量相對鰓和腸比較高。
(6)檢測LPS刺激后白氏文昌魚CFH基因的表達量在不同時間點(2h,4h,6h,8h,10h,12h,24h,48h)的變化,在8h和24h出現(xiàn)了顯著升高,并且在8h上升到最高。此變化初步證明了白氏文昌魚CFH基因參與先天免疫應答,為進一步研究CFH基因在文昌魚中的免疫機制提供了線索。
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