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文檔簡(jiǎn)介
1、研究目的:
癢與痛是一對(duì)有著千絲萬縷聯(lián)系同時(shí)有兼具著顯著差別的軀體傷害性感覺,長(zhǎng)久以來,痛,相較于癢,都吸引著研究者更多的關(guān)注與投入。我們對(duì)于癢的發(fā)生發(fā)展機(jī)制以及神經(jīng)傳導(dǎo)通路相較于痛來說都所知甚少。
致癢物質(zhì)作用于外周癢特異性傳入神經(jīng)纖維被認(rèn)為是瘙癢產(chǎn)生的初級(jí)階段,現(xiàn)今已有眾多的物質(zhì)被證明具有致癢作用。我們?cè)谥暗难芯恐邪l(fā)現(xiàn)在使用完全性弗氏佐劑CFA誘發(fā)小鼠皮膚的慢性炎癥后,皮內(nèi)注射緩激肽可引起小鼠的劇烈瘙癢,并證明
2、這種作用由B1受體介導(dǎo)。然而緩激肽作用復(fù)雜,B1受體分布廣泛,這種致癢作用究竟是直接作用于傳入神經(jīng)纖維抑或有著間接的中間環(huán)節(jié)我們并不清楚。
分布于表皮與真皮中的傳入神經(jīng)纖維與其周圍的角質(zhì)細(xì)胞,炎癥細(xì)胞有著豐富的聯(lián)系。這些細(xì)胞可以釋放多種致癢物質(zhì),如神經(jīng)生長(zhǎng)因子,白介素31等。有研究表明應(yīng)用B1R激動(dòng)劑LDBK作用于人中性粒細(xì)胞可以引起后者的脫顆粒,釋放基質(zhì)金屬蛋白酶MMP9與髓過氧化物酶MPO?;|(zhì)金屬蛋白酶對(duì)于細(xì)胞外基質(zhì)的穩(wěn)
3、定性有著重要影響,許多皮膚病理生理的發(fā)生發(fā)展機(jī)制都有他們參與其中。因此我們進(jìn)行了此項(xiàng)研究,旨在探明MMP-9是否參與了B1R在慢性炎癥條件下的致癢作用。
研究方法:
本研究均選用雄性SPF級(jí)C57BL/6J小鼠,鼠齡5~6周齡,體重20~22g,
購(gòu)置于廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(中國(guó),佛山)小鼠在實(shí)驗(yàn)前在七氟醚麻醉下頸背部剃毛,皮內(nèi)注射CFA50μL。行為學(xué)觀察在注射CFA四天后進(jìn)行。于實(shí)驗(yàn)前30min置小鼠
4、與觀察盒中適應(yīng),隨后頸后皮內(nèi)注射LDBK(20μg,50μL),觀察計(jì)數(shù)隨后30min內(nèi)小鼠搔抓次數(shù)。C57小鼠在行為學(xué)觀察后,在七氟醚麻醉下以4%多聚甲醛溶液進(jìn)行心臟灌注,灌注成功約10分鐘左右,取頸背部炎性皮損區(qū)全層皮膚投入4%多聚甲醛中常溫固定過夜。再取出皮膚標(biāo)本進(jìn)行脫水處理及石蠟包埋,切片,恒溫箱中45℃拷片過夜或60℃2小時(shí)后行原位組織染色。
本研究各組數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,運(yùn)用SPSS19.0版統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行
5、分析。
研究結(jié)果:
1.LDBK皮內(nèi)注射后引起CFA小鼠劇烈的搔抓反應(yīng)。
2.應(yīng)用MMP-9抑制劑SB-3CT可以明顯減少LDBK引起的小鼠搔抓次數(shù)。
3.預(yù)先對(duì)小鼠進(jìn)行中性粒細(xì)胞清除可以明顯減少LDBK引起的小鼠搔抓次數(shù)。
4.皮內(nèi)注射CFA后,小鼠局部皮膚MMP-9于MPO表達(dá)上調(diào),B1R與MPO存在共表達(dá)。
研究結(jié)論:
1.基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9參與了激肽B1
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