金魚人工誘導雌核發(fā)育單倍體胚胎的蛋白質組學研究.pdf

1、以往研究表明在金魚雌核發(fā)育單倍體胚胎發(fā)育過程中，一些對發(fā)育起關鍵作用的基因未能被選擇表達或表達受阻，從而導致單倍體發(fā)育畸形。據羅琛等研究發(fā)現(xiàn)單倍體胚胎發(fā)育不正常是因為單倍體不能選擇二倍體依賴的調控系統(tǒng)。其中Vsxl基因在單倍體正常眼胚胎中能夠表達，而在無腔眼中不能表達。與二倍體相比，Vsxl基因在單倍體胚胎中未能被選擇表達，可能與單倍體胚胎發(fā)育異常有關。 為了揭示金魚雌核發(fā)育單倍體胚胎發(fā)育過程中的這種發(fā)育異常的機制，本文以遺傳背

2、景一致的金魚雌核發(fā)育單倍體形成的正常眼和無腔眼發(fā)育階段的胚胎為材料，通過蛋白質表達水平的差異進行分析，試圖探討影響雌核發(fā)育單倍體金魚眼睛發(fā)育的基因表達調控機理。首先提取胚胎的全蛋白質，采用雙向凝膠電泳進行蛋白質點的分離，獲得了重復性較好的凝膠圖譜，采用PDQUEST 2-D分析軟件對兩者之間的差異蛋白質進行比較分析，經MALDI-TOF/TOF和ESI-QITOF分析，通過MaSCOt軟件搜索初步鑒定了27個差異蛋白質點。 由于

3、金魚基因組數(shù)據庫的缺乏，給其蛋白質鑒定帶來了一定的困難?；谕葱运阉鞯腷last方法(MS BLAST)，是近年新發(fā)展起來的一種用于未知基因組的蛋白質鑒定的搜索工具，已成功應用于許多未知基因組物種的蛋白質鑒定。本文采用MS BLAST方法對經Mascot軟件搜索未能鑒定到的差異蛋白重新鑒定，又有16個差異蛋白質得到了初步鑒定，其中9個是直接測序后進行MS BLAST搜索得到的結果，另外7個是聯(lián)合MS BLAST和SPITC衍生方法得到