力生長因子基因的克隆、表達及產物的純化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、人的力生長因子(human mechano growth factor,hMGF)是一個由110個氨基酸組成的堿性多肽。hMGF具有激活衛(wèi)星細胞,促使細胞增殖,同時抑制其分化的作用。hMGF在維持局部組織質量和組織修復過程中有顯著效果,具有誘導局部蛋白質合成和防止細胞凋亡的高潛能。 在hMGF的研究過程中,用人體材料(血或組織等)作為制備來源是有限的和不可取的,且血清中的hMGF含量非常低。為了獲得大量的hMGF產品,基因工程是

2、可取的途徑。通過人工合成hMGF全基因序列, 以T載體過渡將其克隆至pMAL-p2x、pET-32a(+)及pET-3c載體中,構建重組表達質粒pMAL-p2x-hMGF1、pET-32a(+)-hMGF1及pET-3c-hMGF2,經測序證明正確后,分別轉化入BL21及BL21(DE3)plyss-star菌中進行表達研究。經過IPTG(異丙基硫代-β-半乳糖苷)誘導表達后,通過SDS-PAGE分析表明融合表達載體pMAL-p2x的表

3、達效果較好,能表達出分子量約為37KD的融合蛋白,表達量約占菌體蛋白總量的25%。發(fā)酵后,菌體采用超聲破菌,融合蛋白以包涵體形式存在。 通過不同濃度的尿素洗滌溶解包涵體,以Ni-NTA樹脂對目的蛋白進行分離純化,分步透析法復性目的蛋白以后用EK酶酶切,得到天然結構的hMGF蛋白。經SDS-PAGE電泳檢測,純度達到90%以上。 上述結果表明,本實驗已經成功的得到了pMAL-p2x-hMGF1融合重組表達質粒,并能在BL21菌中以

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