膽固醇配基色譜在蛋白質復性中的應用.pdf

1、色譜復性是一種非常有效的蛋白質復性方法，尺寸排阻色譜、離子交換色譜、親和色譜已經成功應用于很多蛋白質的復性中。原則上疏水作用介質能夠捕捉具有暴露疏水部位的變性蛋白質和折疊中間體，從而抑制聚集發(fā)生，也可以應用于蛋白質復性。但商業(yè)化的疏水介質一般是針對于蛋白質分離而開發(fā)的，其疏水作用較強，不利于蛋白質的復性。因此有必要開發(fā)一種具有適當疏水強度的色譜介質，在抑制分子間聚集作用的同時又不會影響復性過程中的疏水塌縮，更好地實現復性。 本

2、文以三聚氯氰為連接臂，通過兩步法將膽固醇修飾到Sepharose CL-6B介質上，合成出一種新型的疏水介質，構建了膽固醇配基色譜。在此基礎上，選取還原變性的溶菌酶(Lys)為目標蛋白質，考察了稀釋復性、膽固醇配基色譜穿過復性和吸附-洗脫復性這三種不同方法對復性效果的影響，研究結果表明：當上樣量為0.25 mg Lys/ml介質時，采用吸附-洗脫方法可最終得到96.3％的蛋白收率和91.4％的活性收率，大大高于其它兩種方法。圓二色光譜、