口蹄疫病毒組合基因在家蠶桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)中的表達(dá)及差異分析.pdf

1、口蹄疫(FMD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起豬、牛、羊等偶蹄動物的一種烈性傳染病，嚴(yán)重危害畜牧業(yè)生產(chǎn)，對國民經(jīng)濟(jì)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前傳統(tǒng)疫苗在FMD預(yù)防控制中仍占主導(dǎo)地位，但因生產(chǎn)成本昂貴、疫苗制備過程中病毒逃逸等潛在危險難以避免等因素，急需研制一種安全、高效的FMD分子疫苗。本研究利用家蠶/桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)進(jìn)行了O型FMDV組合基因的表達(dá)及AsiaI型FMDV組合基因在不同家蠶品種中的表達(dá)差異分析，為利用家蠶生物反應(yīng)器生產(chǎn)FMD

2、分子疫苗提供參考依據(jù)。 (1)選用OMⅢ株FMDV衣殼蛋白前體P1、非結(jié)構(gòu)蛋白2A、3C，將其插入家蠶桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體pVL1393中，構(gòu)建重組質(zhì)粒pVL-P12A3C，與線性化病毒Bm-BacPAK6 DNA共轉(zhuǎn)染家蠶BmN細(xì)胞，獲得重組病毒Bm-P12A3C。通過免疫熒光技術(shù)證明重組病毒能夠正確表達(dá)插入的外源基因。將共轉(zhuǎn)染后的重組病毒感染家蠶5齡幼蟲，雙抗體夾心ELISA法測定目的蛋白在家蠶血淋巴中獲得了表達(dá)。對重組病毒進(jìn)

3、行篩選和純化，將篩選后的重組病毒繼續(xù)感染家蠶5齡起幼蟲，用相同的方法進(jìn)行檢測，結(jié)果表明FMDV抗原在家蠶中獲得了較高的表達(dá)。 (2)選用了20個品種的家蠶蠶蛹，注射可以高效穩(wěn)定表達(dá)FMDV Asia Ⅰ型P1-2A3C基因的重組病毒，通過雙抗體夾心ELISA方法檢測目的蛋白在蠶蛹中的表達(dá)情況，并進(jìn)行了差異分析。結(jié)果表明目的蛋白在各品種家蠶中的表達(dá)量存在一定差異，其中以9、10、12、14、15、17號等品種表達(dá)量相對較高。