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文檔簡介
1、穿心蓮作為一種傳統(tǒng)中草藥主要用于治療感冒咳嗽,發(fā)燒,喉炎和一些感染性疾病。近年來,人們發(fā)現(xiàn)其提取物中有一種活性成分——穿心蓮內(nèi)酯,具有治療多種疾病的功能,其中就包括對各種腫瘤細胞的殺傷作用。因此,在癌癥的化療上具有很好的潛在價值。胃癌是一種高發(fā)的惡性腫瘤疾病,好發(fā)年齡在50歲以上,男女比例為2∶1。目前臨床上對于胃癌治療手段還只限于手術治療,化療和放射治療;而且對于保守治療化療的藥物治療效果較差,因此找到新型的抗腫瘤藥物或者聯(lián)合用藥具有
2、重要意義。本研究重點是探索穿心蓮內(nèi)酯對胃癌細胞SGC-7901的生長是否抑制和作用機理。
細胞活力檢測實驗(MTT)表明:SGC-7901細胞在不同濃度處理24和48小時后,穿心蓮內(nèi)酯對腫瘤細胞具有濃度時間依賴的生長抑制效果;流式細胞技術檢測到藥物處理過后的細胞被抑制在G2/M期,并且伴有內(nèi)源途徑凋亡的發(fā)生;并發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)的ROS水平上升和線粒體膜電位的下降現(xiàn)象。Hoechst33258染色進一步證明細胞凋亡的存在;蛋白免疫印跡
3、法(western blot)檢測到周期與凋亡相關蛋白表達水平的變化;藥物處理過后,胃癌細胞內(nèi)的ATP以及GSH水平明顯下調(diào);NANDP補償實驗觀察到細胞的周期抑制得到恢復,但是β-萘黃酮預處理加強了穿心蓮內(nèi)酯對周期的抑制。
p53蛋白表達量上調(diào),與調(diào)控G2/M期的關鍵蛋白p-cdc2表達量上調(diào)、Cyclin B1表達水平下調(diào)表明,穿心蓮內(nèi)酯對細胞的周期抑制的確發(fā)生在G2/M期,同時調(diào)控cdc2活性的蛋白cdc25與其活性調(diào)控
4、蛋白Chk2分別下調(diào)與上調(diào)表明穿心蓮內(nèi)酯造成的G2/M期抑制與DNA損傷有關;Cleaved Caspase-3,Cleaved Caspase-9,和細胞色素c上調(diào)以及Bax的上調(diào),Bcl-2的下調(diào)揭示穿心蓮內(nèi)酯同時誘導了細胞線粒體內(nèi)源途徑的凋亡。
細胞內(nèi)GSH和ATP水平的下降與流式檢測到的ROS水平上升和膜電位的崩潰一致,ROS消除劑NAC與NADPH預處理后,對藥物造成的GSH和ATP下降有所恢復。此外NADPH的加入
5、還恢復了周期抑制,下調(diào)了p53,p-cdc2與Cyclin B1以及抑制了Cleaved Caspase-9,Bax的上調(diào)與Bcl-2的下調(diào)。這些說明穿心蓮內(nèi)酯誘導的周期抑制和線粒體內(nèi)源途徑的凋亡與活性氧有關。
總之,穿心蓮內(nèi)酯是通過上調(diào)胞內(nèi)ROS水平使得線粒體膜電位崩潰,進而通過p53/cdc2/Cyclin B1和Chk2/cdc25/cdc2信號通路誘發(fā)G2/M期的周期抑制與內(nèi)源途徑的凋亡誘導抑制SGC-7901細胞的生
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