脂肪因子網(wǎng)膜素-1的自分泌效應與結腸癌發(fā)病的相關性研究.pdf

1、目的：
　?。?）以結腸癌患者的癌組織和癌旁組織為研究對象，檢測癌組織和癌旁組織中Omentin-1的表達和定位。
　　（2）以結腸癌細胞SW480為研究對象，通過體外培養(yǎng)結腸癌細胞，檢測結腸癌細胞是否能夠自分泌脂肪因子Omentin-1。
　?。?）以結腸癌患者的癌組織和癌旁組織為研究對象，檢測Akt信號分子表達的變化；前炎癥因子TNF-α、IL-1β和血管生成因子VEGF-A的表達定位，了解Omentin-1參與結

2、腸癌發(fā)生的機制是否涉及Akt分子信號通路，結腸癌組織中Omentin-1表達是否與結腸癌微環(huán)境存在聯(lián)系。
　　方法：
　?。?）應用實時熒光定量PCR方法檢測Omentin-1在結腸癌組織和癌旁組織中的mRNA表達。采用Western Blot方法檢測Omentin-1在結腸癌組織和癌旁組織中的蛋白表達。免疫組織化學方法觀察Omentin-1蛋白的表達以及定位。
　?。?）通過體外培養(yǎng)結腸癌細胞，應用實時熒光定量PCR

3、方法檢測不同時間點細胞裂解液中脂肪因子Omentin-1 mRNA的相對表達量。使用ELASA試劑盒檢測不同時間點細胞上清液和細胞裂解液中脂肪因子Omentin-1蛋白的表達量。
　?。?）應用Western Blot方法檢測各組織中pAkt/Akt信號分子蛋白的變化，以及與相應組織中Omentin-1蛋白表達的相關性分析。
　?。?）應用免疫組織染色的方法觀察 TNF-α、IL-1β和 VEGF-A的在結腸癌組織和癌旁組織

4、中蛋白的表達定位，以及與相應組織中Omentin-1蛋白表達的相關性分析。
　　結果：
　　（1）結腸癌患者的結腸癌組織中Omentin-1 mRNA、Omentin-1蛋白的表達量均高于癌旁組織中的表達量，且差異具有統(tǒng)計學意義（mRNA：0.983±0.105 vs5.381±1.250，P=0.014<0.05；蛋白：1.086±0.242 vs0.612±0.064，P<0.01）；電子顯微鏡下觀察，Omentin-1

5、蛋白經(jīng)過染色后呈棕黃色，陽性表達主要在結腸癌細胞的細胞漿和細胞間質(zhì)內(nèi)，癌旁正常細胞也存在少量表達。且結腸癌組織切片視野的平均光密度值高于癌旁組織，差異具有統(tǒng)計學意義（0.621±0.102 vs0.295±0.030，P<0.01）。
　?。?）結腸癌細胞的細胞裂解液中可以檢測出脂肪因子Omentin-1 mRNA和蛋白的表達；細胞上清液中可以檢測出Omentin-1蛋白的表達，并且細胞裂解液中Omentin-1蛋白的表達量較上清

6、液中的更多，其表達均具有時間依賴性。
　　（3）結腸癌患者的結腸癌組織中pAkt/Akt蛋白表達量高于癌旁組織中表達量，差異具有統(tǒng)計學意義（1.891±0.245 vs1.076±0.094，P=0.006<0.01）。通過Pearson相關分析顯示，Omentin-1蛋白的表達與pAkt/Akt蛋白表達呈正相關關系（r=0.764，P＜0.01)，且具有較強的相關性，線性回歸分析表明，脂肪因子Omentin-1是pAkt/Akt

7、蛋白表達水平的影響因素。
　?。?）免疫組化染色后，電子顯微鏡下觀察：結腸癌組織中 TNF-α、IL-1β和 VEGF-A蛋白的表達明顯高于癌旁組織內(nèi)的表達，差異均具有統(tǒng)計學意義（0.546±0.078 vs0.231±0.064，0.673±0.103 vs0.336±0.044，0.578±0.079 vs0.250±0.079，P＜0.01~0.05），但TNF-α、IL-1β的表達與Omentin-1的表達存在負相關關系（

8、r分別-0.767和-0.334，P均＜0.05）。而與VEGF-A的表達未顯示出相關關系。
　　結論：
　?。?）結腸癌細胞能夠自分泌表達脂肪因子Omentin-1，可能通過內(nèi)分泌、自分泌和旁分泌的途徑，參與結腸癌的發(fā)生、進展。
　?。?）脂肪因子Omentin-1參與結腸癌發(fā)生的機制可能涉及Akt信號通路的激活。
　?。?）Omentin-1的表達與前炎癥因子 IL-1β、TNF-α存在負性相關，而與VEGF