腦出血急性期腦皮層蛋白質(zhì)組學(xué)研究.pdf

1、目的：
　　腦出血是卒中的一種毀滅性的方式，在亞洲國家每年腦出血的發(fā)生率被發(fā)現(xiàn)以2-3倍增長。和白色人種相比中國人種被報道有更高的腦出血發(fā)生率。腦出血通常分為原發(fā)性和繼發(fā)性，在腦出血急性期，出血作為一個迅速擴大的顱內(nèi)團塊直接破壞神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)和直接壓縮周圍的組織造成傷害，這個時期進行及時處理非常關(guān)鍵，可以阻止組織的進一步損害，而找到急性期預(yù)示病情變化的標(biāo)志物也成了關(guān)鍵點。目前對腦出血標(biāo)志物的研究進行了很多，但是仍沒有確定的、被臨床認

2、可的標(biāo)記物。我們的研究基于以上的情況，對腦出血急性期各時間點的標(biāo)本進行蛋白質(zhì)組學(xué)研究，獲得差異蛋白，并且通過western-blot進行驗證獲得標(biāo)記物蛋白及探索腦出血急性期可能的發(fā)病機制。
　　方法：
　　采用在立體定向儀下腦內(nèi)注入自體血（尾動脈血50ul）構(gòu)造腦出血模型，分別在腦出血后2小時、4小時、6小時、8小時（每組5只大鼠）取血腫同側(cè)腦皮層組織及正常大鼠腦皮層組織進行蛋白裂解（450μl8M Urea和50μl的磷酸

3、酶抑制劑裂解）、純度測定（Bradford法）、還原烷基化、液相預(yù)分離（RIGOL L-3000高效液相色譜儀）、質(zhì)譜測定（Thermo質(zhì)譜儀）、數(shù)據(jù)庫檢索（Proteome Discoverer1.4；搜索引擎：MASCOT；數(shù)據(jù)庫：NCBI-rat ref-sequence protein database(60122 protein，updated on07-2015)、統(tǒng)計學(xué)處理獲得差異蛋白。在獲得的差異蛋白中篩選出上調(diào)蛋白 n

4、eurofibromin1和下調(diào)蛋白 Ras-related protein Rab15，通過western-blot在同樣條件處理的組織樣品中驗證其表達水平是否與質(zhì)譜篩選結(jié)果一致。
　　結(jié)果：
　　根據(jù)質(zhì)譜分析、數(shù)據(jù)庫檢索共獲得差異表達蛋白807個，根據(jù)統(tǒng)計學(xué)處理與正常組對比具有明顯差異的上調(diào)蛋白169個，下調(diào)蛋白173個。根據(jù)Ratio值及P值重點篩查出上調(diào)蛋白3個:NF1、Vgf、Ncs1，下調(diào)蛋白8個：Rab15、S

5、lcla4、Eps15、Arhgap21、Npdc1、Mycbp、Nrn1、Tp53rk。選取上調(diào)蛋白neurofibromin1，下調(diào)蛋白Ras-related protein Rab15進行western-blot，結(jié)果顯示腦出血后8小時內(nèi)蛋白neurofibromin1逐漸高表達，而蛋白Ras-related protein Rab15是逐漸低表達。
　　結(jié)論：
　　1、腦出血急性期皮層神經(jīng)元蛋白表達有一定規(guī)律性，上調(diào)