CMG2對膠質瘤細胞侵襲能力的促進作用及其機制.pdf

1、背景和目的:
　　膠質瘤是中樞神經系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。盡管近年來其治療方法有了長足的進步，但其療效仍不盡人意。高度侵襲性是導致病人預后差的重要原因之一。因此，深入研究膠質瘤侵襲的分子機制，對于發(fā)展有效的膠質瘤治療新策略具有重要意義。
　　毛細血管形態(tài)發(fā)生基因(Capillary morphogenesis gene2，cmg2)因其在血管形成過程顯著上調表達而被發(fā)現(xiàn)，因其編碼的蛋白能介導炭疽桿菌毒素進入細胞內，故又稱其為炭疽

2、毒素受體2(Anthrax Toxin Receptor2，ANTXR2)，并被證明是炭疽桿菌毒素親和力最強的受體。業(yè)已闡明CMG2突變會導致幼年透明性纖維瘤病(Juvenile Hyaline Fibromatosis)。但CMG2確切的生理功能尚不十分清楚。近年來，已有關于CMG2與腫瘤關系的報道，CMG2高表達能促進前列腺癌的轉移。正常腦組織中不表達CMG2，至今也無CMG2與膠質瘤關系的研究報道，但本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)CMG2在

3、膠質瘤中顯著高表達，并與腫瘤級別呈正相關而與病人預后呈負相關。鑒于侵襲性是膠質瘤最顯著的惡性生物學行為之一，本課題研究的目的在于探索CMG2在膠質瘤侵襲中的作用及可能的的分子機制，從而有望加深對膠質瘤侵襲機制的認識，也可能為膠質瘤的預后判斷提供新的指標并為臨床治療提供新的靶點。
　　方法:
　　1.利用慢病毒方法，構建穩(wěn)定過表達CMG2的膠質瘤細胞U87OE和091214OE以及穩(wěn)定敲低CMG2表達的膠質瘤細胞U87-sh2

4、。
　　2.Matrigel-transwell侵襲實驗觀察過表達/敲低CMG2細胞侵襲能力的差異，劃痕實驗觀察其遷移能力的改變。
　　3.建立小鼠原位移植瘤模型，觀察過表達CMG2與否的膠質瘤細胞在體內的侵襲能力的差異以及對小鼠生存期的影響。
　　4.細胞免疫熒光方法用于觀察不同CMG2表達狀態(tài)膠質瘤細胞絲狀偽足和層狀偽足的差異。
　　5.Western Blot檢測比較CMG2過表達與否的膠質瘤細胞中YAP及

5、p-YAP的表達水平。
　　6.免疫組織化學方法分析72例不同級別的膠質瘤病人腫瘤組織中YAP的表達特征，采用Kaplan-Meier法和LogRank檢驗分析YAP在膠質瘤組織中的表達與病人預后的關系。
　　結果:
　　1.CMG2促進膠質瘤細胞侵襲和遷移能力
　　(1)體外Matrigel-transwell侵襲實驗和劃痕實驗顯示:與對照組相比較，過表達CMG2增強膠質瘤細胞侵襲和遷移能力(p＜0.05)，而

6、敲低CMG2則降低膠質瘤細胞的遷移能力(p＜0.05)。
　　(2)小鼠體內原位移植瘤實驗顯示:與對照組相比較，種植了過表達CMG2的膠質瘤細胞的小鼠腫瘤組織前沿具明顯侵襲現(xiàn)象，小鼠生存期縮短(p＜0.05);種植CMG2下調表達細胞的小鼠生存期延長(p＜0.05)。
　　2.CMG2促進膠質瘤細胞層狀偽足和絲狀偽足的形成
　　細胞免疫熒光染色分析發(fā)現(xiàn):與對照組相比較，過表達CMG2的膠質瘤細胞能形成更多的層狀偽足和絲

7、狀偽足。
　　3.CMG2上調膠質瘤細胞中YAP的表達
　　Western Blot檢測分析發(fā)現(xiàn):伴隨過表達CMG2的膠質瘤細胞偽足形成增多，Hippo通路的關鍵效應蛋白YAP的表達上調。
　　4.膠質瘤組織中YAP的表達與腫瘤級別呈正相關而與患者預后呈負相關
　　(1)免疫組織化學分析顯示:YAP在高級別膠質瘤中的表達高于低級別(p＜0.05)。
　　(2)生存分析顯示:YAP高表達的膠質瘤病人預后不良(