在食管癌ECA109細胞中p107-Survivin結合對靶基因表達調控的研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：探討p107與轉錄因子Survivin在食管癌ECA109細胞中是否存在結合現(xiàn)象及相互作用，并觀察p107與Survivin的結合現(xiàn)象對IKKβ的表達是否具有調控作用。
　　方法：構建CMV-MCS-3flag-Survivin-SV40-Neomycin和CMV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin載體，用Western-blot方法檢測其在食管癌ECA109細胞中表達情況。采用免疫共沉淀技術檢測p10

2、7蛋白與Survivin蛋白是否存在結合現(xiàn)象，采用細胞核定位實驗檢測p107蛋白與Survivin蛋白在細胞內的定位，最后采用雙熒光素酶報告基因技術檢測這種結合現(xiàn)象對IKKβ啟動子活性的調控。
　　結果：Western-blot結果顯示在食管癌ECA109細胞中轉染CMV-MCS-3flag-Survivin-SV40-Neomycin和C MV-MCS-3flag-p107-SV40-Neomycin質粒后，在大小約19.0kD

3、的位置檢測出含F(xiàn)lag標簽的Survivin蛋白以及16.5kD的位置檢測出內源性的Survivin蛋白，大約110.0k D的位置檢測出含F(xiàn)lag標簽的p107蛋白表達。免疫共沉淀結果顯示p107蛋白與Su rvivin蛋白在食管癌ECA109細胞中具有結合現(xiàn)象。細胞核定位實驗檢測出p107蛋白與Survivin蛋白在食管癌ECA109細胞中的細胞內的定位。熒光素酶報告基因技術檢測p107蛋白和Survivin蛋白的結合現(xiàn)象及相互作用

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