乙型流感病毒Vero細胞適應株的選育及其基因研究.pdf

1、流感病毒(influenza virus)是一種能引起急性呼吸道疾病的病毒，具有高度傳染性，主要經(jīng)空氣飛沫傳播，因此它能在短期內突然發(fā)生，迅速蔓延，造成不同程度的流行。流行性感冒(流感)病毒在世界范圍內引起人畜的發(fā)病和死亡。目前對流感的防治主要是接種流感疫苗。乙型流感病毒疫苗是其重要的組成部分。傳統(tǒng)制備疫苗的方法是使用雞胚生產(chǎn)，存在很多缺陷和局限性，應用哺乳動物細胞生產(chǎn)流感疫苗是個更好的選擇。Vero細胞是WHO積極推薦用于疫苗生產(chǎn)的細

2、胞基質。在乙型流感疫苗的研制中，乙型流感病毒感染很難適應Vero細胞，并且很難得到持續(xù)的高產(chǎn)。在大量臨床樣本的基礎上，本論文成功篩選到一株乙型流感病毒Vero細胞適應株，且能達到高產(chǎn)，穩(wěn)定的目的。將篩選到的毒株進行一系列的抗原性分析和基因性分析，這些研究為Vero細胞乙型流感疫苗的開發(fā)提供前提。該毒株可以作為親本株，采用遺傳重配或反向遺傳學技術將其與流行毒株重配，制備Vero細胞乙型流感疫苗生產(chǎn)毒種。 第一部分乙型流感病毒在Ve

3、ro細胞上的適應株的選育 本實驗在乙型流感病毒很難在Vero細胞上適應的情況下，首先探索病毒的培養(yǎng)條件。確定病毒培養(yǎng)液中的TPCK—胰酶終濃度1μg/ml，NaHCO3終濃度198μg/ml。和采用MEM作為基礎培養(yǎng)基同時不添加谷氨酰胺等條件。在30株臨床樣本毒株中最終選育出一株乙型流感病毒Vero細胞高產(chǎn)適應株，連續(xù)傳代21個代次，結果穩(wěn)定。同時進行相關生物學檢測。 第二部分乙型流感病毒Vero細胞適應株B/Yunna