間充質干細胞生物學特性研究及肌腱損傷和肌肉損傷動物模型的構建.pdf

1、肌腱損傷和肌肉損傷是體育運動中常見的運動性疾病，影響運動員機能水平和運動能力的發(fā)揮，成為臨床醫(yī)學和運動醫(yī)學的主要研究問題。干細胞在個體生長發(fā)育和病理組織再生修復中具有重要作用。干細胞發(fā)現(xiàn)及其生物學特性的研究為肌腱和肌肉生理、病理機制的研究提供了基礎，同時為干細胞促進損傷的修復提供實驗基礎。本研究主要建立了肌腱干細胞和肌肉衛(wèi)星細胞體外擴增培養(yǎng)體系，研究其生物學特性，建立肌腱損傷和肌肉損傷小鼠動物模型，研究干細胞在運動性損傷修復中的作用，得

2、到以下結果：
　　1.采用 I型膠原酶消化分離胎牛和仔豬跟腱來源肌腱干細胞，分離后的細胞在體外培養(yǎng)條件下分別傳代至43代和11代；分別通過RT-PCR和免疫組織化學檢測法對兩個物種來源的肌腱干細胞進行特異性標記物鑒定；免疫組織化學檢測結果顯示，細胞對 CollagenⅠ、CollagenⅢ、CD105、CD44、Tenascin-C,Tnmd、nucleostemin等均表達陽性；RT-PCR結果顯示，不同傳代次數(shù)的細胞均表達 C

3、ollagenⅠ和 CollagenⅢ，不表達 CollagenⅡ，表明所分離的細胞為肌腱干細胞；對分離的細胞進行生物學特性鑒定；在體外通過不同誘導液，將肌腱干細胞分別誘導成成骨細胞、軟骨細胞和脂肪細胞，RT-PCR檢測到軟骨細胞特異性基因均陽性表達；
　　2.采用I型膠原酶和胰酶聯(lián)合消化法消化仔豬脛骨前肌肌肉組織，分離的細胞接種后通過差速培養(yǎng)法純化并培養(yǎng)至12代，通過 RT-PCR和免疫組織化學檢測鑒定細胞均表達Myod，Moy

4、genin，Pax7，c-Met，PCNA和 Nanog，對分離純化后的細胞進行生物學特性和多分化潛能研究。
　　3.采用心臟毒素（CTX）構建小鼠肌肉損傷模型，石蠟病理切片顯示肌肉正常組織被破壞，血清學檢測肌肉中肌酸激酶（CK）含量明顯超出正常范圍，對肌肉衛(wèi)星細胞進行細胞示蹤劑（CM-Dil）標記后移植到損傷部位，組織學和血清學結果顯示肌肉損傷有所恢復；通過I型膠原酶誘導的小鼠肌腱損傷制備小鼠肌腱損傷模型，石蠟切片顯示肌腱膠原排

5、列紊亂，肌腱基質嚴重破壞，對肌腱干細胞用 C M-Dil標記，將標記后的細胞注射到小鼠肌腱損傷位點，觀察組織學和血清學相關指標，結果顯示細胞移植治療組損傷肌腱有良好修復；
　　綜上所述，本文介紹了肌腱損傷、肌肉損傷和干細胞研究進展，在體外成功分離、培養(yǎng)了胎牛、仔豬跟腱來源TDSCs和仔豬肌肉衛(wèi)星細胞，并對其生物學特性和多分化潛能進行了研究；通過干細胞體外移植治療，損傷的小鼠肌腱和肌肉組織得到恢復,初步為以干細胞為基礎的細胞療法治療