簡(jiǎn)介：流行性感冒簡(jiǎn)稱流感，是由流感病毒（INFLUENZAVIRUS）引起的急性呼吸系統(tǒng)疾病，具有傳播迅速，可反復(fù)感染的特點(diǎn)。預(yù)防流感大流行爆發(fā)的最有效手段是接種流感疫苗。傳統(tǒng)流感病毒疫苗目前還存在很多需要改進(jìn)的地方，使用佐劑是改進(jìn)方法之一。在流感疫苗中使用佐劑能夠增強(qiáng)其免疫原性，并且能夠減少單劑流感疫苗的用量，對(duì)于開發(fā)能夠預(yù)防潛在的大流行流感的疫苗以及在大流行流感爆發(fā)時(shí)候迅速生產(chǎn)足夠劑量的疫苗等均具有現(xiàn)實(shí)意義。第一部分納米乳劑作為H3N2滅活流感病毒疫苗佐劑的研究乳劑作為流感疫苗佐劑已經(jīng)具有一定的應(yīng)用，納米乳劑是粒徑小于100NM的乳劑。本實(shí)驗(yàn)首先尋找具有安全性的，能夠形成納米乳劑的表面活性劑、助表面活性劑、油相和水相，之后通過(guò)三元相圖法對(duì)各相的成分及比例進(jìn)行研究，確定EL和SPAN80質(zhì)量比為11的混合物作為表面活性劑，配方為ELSPAN801，2丙二醇注射用大豆油。將得到的優(yōu)化納米乳劑包裹H3N2滅活流感病毒疫苗接種昆明種小鼠。納米乳劑組小鼠的血凝抑制效價(jià)在42D時(shí)達(dá)到1920，中和抗體滴度達(dá)到447，均超過(guò)鋁佐劑組及疫苗組4倍以上，并且該組小鼠體重增長(zhǎng)正常，證明納米乳劑作為流感疫苗佐劑同時(shí)具有安全性及有效性，是較好的流感疫苗佐劑候選。第二部分中草藥提取物作為H3N2滅活流感病毒疫苗佐劑的研究我國(guó)具有中草藥提取和應(yīng)用的傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)。一些中草藥在應(yīng)對(duì)禽流感以及甲型H1N1流感的過(guò)程中扮演了重要角色，某些中草藥提取物能夠增強(qiáng)免疫反應(yīng)也是研究人員的共識(shí)。本實(shí)驗(yàn)采用40種中草藥提取物作為流感疫苗的佐劑候選，在動(dòng)物體內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，從中篩選有效的佐劑，并研究佐劑與疫苗的劑量的最佳配比。首先將40種中草藥提取物分別與H3N2滅活流感病毒疫苗混合，接種小鼠，初免后每隔7D尾部動(dòng)脈采血，21D時(shí)加免一劑，采血后分離血清，測(cè)定各中草藥提取物佐劑組及對(duì)照組對(duì)H3N2病毒的血凝抑制效價(jià)并進(jìn)行對(duì)比，初步篩選出鎖陽(yáng)、天冬及鱉甲三種能夠明顯提高血凝抑制抗體的佐劑候選。之后對(duì)初步篩選中效果最好的鎖陽(yáng)提取物設(shè)計(jì)流感疫苗及鎖陽(yáng)劑量的二次旋轉(zhuǎn)回歸正交試驗(yàn)，證明25ΜG血凝素含量和08MG鎖陽(yáng)含量是最優(yōu)化比例，數(shù)據(jù)擬合為1778，與實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)1824基本相符，證明該方法合理，數(shù)據(jù)可靠。鎖陽(yáng)血凝抑制效價(jià)可達(dá)1824，中和抗體滴度達(dá)562，均高于鋁佐劑組及疫苗組4倍以上。并且各組小鼠體重增長(zhǎng)超過(guò)空白對(duì)照組，證明鎖陽(yáng)作為佐劑具有安全性及有效性。

簡(jiǎn)介：分類號(hào)R739，63；R730，23單位代碼10422密級(jí)公開學(xué)號(hào)200820787博士學(xué)位論文論文題目慢病毒介導(dǎo)的CAVEOLIN1小干擾RNA對(duì)下咽癌FADU細(xì)胞株生長(zhǎng)作用的體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)研究RNAINTERFERENCEOFCAVEOLINLVIALENTIVIRALVECTORINHIBITSGROWTHOFHYPOPHARYNGEALSQUAMOUSCELLCARCJNOMAFADUCELLS，～W豫DAND，ⅣP，YD作者姓學(xué)院名專業(yè)名指導(dǎo)教合作導(dǎo)名整雪控稱醫(yī)芏睦稱戛曼墮噬鞋掌師鋈靳屋夔授師2012年4月16日原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的成果。除文R，已經(jīng)灃明引川的內(nèi)容外，本淪文小包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的科研成果。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本聲明的法律責(zé)任由本人承擔(dān)。論文作者簽名世砰日蚶】塑生Ⅱ關(guān)于學(xué)位論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解“F東大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的艦定，同意學(xué)校保留或向國(guó)家有關(guān)部R或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許淪文被查閱和借閱；本人授權(quán)山東大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文和匯編本學(xué)位論文。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定論文作者簽名L蘭塑至導(dǎo)師簽名日期絲竺旦

簡(jiǎn)介：點(diǎn)擊查看更多AnkG對(duì)小鼠精神行為和認(rèn)知功能的影響及機(jī)制探討.pdf精彩內(nèi)容。

簡(jiǎn)介：鼻咽癌中EB病毒潛伏感染與免疫細(xì)胞因子IL17／IL17R信號(hào)軸的關(guān)系THERELATIONSHIPBETWEENLATENTINFECTIONOFEBVANDIMMUNECELLFACTORSIL17／IL一17RSIGNALAXISINNASOPHARYNGEALCARCINOMA學(xué)科門類學(xué)科、醫(yī)學(xué)專業(yè)病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向腫瘤病理學(xué)年級(jí)二。一O級(jí)研究生姓名導(dǎo)師姓名起止日期20109～20135廣東醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室二O一三年五月目錄中文摘要。1英文摘要。41前言711研究背景712研究目的913研究?jī)?nèi)容92臨床病理部分1021研究目的1022材料與方法。1O23結(jié)果1424討侖183實(shí)驗(yàn)病理部分2631研究目的2632材料與方法2633結(jié)果3334討論384小結(jié)40參考文獻(xiàn)41文獻(xiàn)綜述。46綜述參考文獻(xiàn)56致謝64附錄一縮寫詞中英文對(duì)照65附錄二在讀碩士期間的科研情況66

簡(jiǎn)介：分類號(hào)密級(jí)UDC編號(hào)學(xué)位論文S100Β和SPECT在非癡呆型血管性認(rèn)知功能障礙患者應(yīng)用價(jià)值研究S100ΒANDSPECTINVASCULARCOGNITIVEIMPAIRMENTNODEMENTIAINPATIENTSWITHAPPLICATIONVALUE劉亮指導(dǎo)教師姓名王文靜教授安醫(yī)科大學(xué)附屬省立醫(yī)院申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別碩士專業(yè)名稱神經(jīng)病學(xué)提交論文日期2014318論文答辯日期20145學(xué)位授予單位和日期安徽醫(yī)科大學(xué)20146答辯委員會(huì)主席胡紀(jì)源教授評(píng)閱人孫中武教授段瑞生教授2014年5月學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名日期學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解安徽醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定學(xué)校有權(quán)保留學(xué)位論文并向國(guó)家主管部門或其指定機(jī)構(gòu)送交論文的電子版和紙質(zhì)版，有權(quán)允許論文進(jìn)入學(xué)校圖書館被查閱，有權(quán)將學(xué)位論文的內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，有權(quán)將學(xué)位論文的標(biāo)題和摘要匯編出版。愿意將本人的學(xué)位論文提交中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)、中國(guó)優(yōu)秀碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)和中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)中全文發(fā)表，并可以以電子、網(wǎng)絡(luò)及其他數(shù)字媒體形式公開出版，并同意編入CNKI中國(guó)知識(shí)資源總庫(kù)，在中國(guó)博碩士學(xué)位論文評(píng)價(jià)數(shù)據(jù)庫(kù)中使用和在互聯(lián)網(wǎng)上傳播。保密的學(xué)位論文在解密后適用本規(guī)定。學(xué)位論文作者簽名導(dǎo)師簽名日期日期

簡(jiǎn)介：目的ALIARDS是一種較為常見的嚴(yán)重急性進(jìn)行性缺氧性呼吸衰竭，盡管在過(guò)去的20年對(duì)其防治進(jìn)行了深入研究，由于其發(fā)病機(jī)制尚未完全明確，臨床上缺乏特效治療方法，仍以器官功能和全身支持治療為主，尤其是呼吸支持治療，故其病死率雖有所下降，但仍高達(dá)40％。因此，研究新的治療策略仍是近年來(lái)所關(guān)注的熱點(diǎn)問(wèn)題。細(xì)胞凋亡在ALIARDS發(fā)病中起著重要作用。肺泡上皮細(xì)胞（AEC）、肺血管內(nèi)皮細(xì)胞（PVEC）凋亡會(huì)引起呼吸膜通透性增高，導(dǎo)致滲透性肺水腫、微小肺不張和肺血管阻力增高等改變，是ALIARDS發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。故抑制AEC、PVEC凋亡可能是防治ALI的重要途徑和手段。脂多糖（LPS）和TNFΑ等可通過(guò)激活CASPASE8誘導(dǎo)AEC、PVEC凋亡，而FAS相關(guān)死亡域樣白介素1Β轉(zhuǎn)換酶抑制蛋白（FLIP）是一種與CASPASE8有顯著同源性的抗凋亡蛋白，它可以與CASPASE8競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合FADD，阻斷DISC的組裝，從而抑制細(xì)胞凋亡。本課題組前期體外研究已證實(shí)FLIP重組體腺病毒（ADFLIP）可明顯抑制經(jīng)FAS誘導(dǎo)的AEC、PVEC細(xì)胞凋亡。為進(jìn)一步驗(yàn)證ADFLIP在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的抗凋亡保護(hù)作用，我們利用ADFLIP溶液滴鼻吸入感染大鼠，檢測(cè)其對(duì)肺組織FLIP表達(dá)水平的影響并評(píng)價(jià)對(duì)大鼠ALIARDS的防治效果；觀察其對(duì)Ⅱ型AEC、PVEC細(xì)胞凋亡的抑制作用并探討可能的機(jī)制。這將為ALIARDS的基因治療提供重要的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1ADFLIP最佳表達(dá)時(shí)間確定按滴鼻后處死動(dòng)物的時(shí)間將24只SD大鼠隨機(jī)分為4組每組6只。1％戊巴比妥鈉50MGKG腹腔注射麻醉后，予ADEGFP腺病毒500ULKG滴鼻吸入以感染各組SD大鼠，分別于吸入后24H、48H、72H和96H處死各組大鼠，熒光顯微鏡下觀察各組大鼠的肺熒光蛋白EGFP表達(dá)。2ADFLIP在體研究動(dòng)物分組48只SD大鼠隨機(jī)分為4組，每組12只。①FLIP治療組先經(jīng)腹腔注射脂多糖（LPS）5MGKG4－6H成功制備出內(nèi)毒素型大鼠ALI模型，之后以1％的戊巴比妥鈉50MGKG充分麻醉，予FLIP腺病毒溶液（231011VPML）500ULKG滴鼻以感染ALI大鼠；②對(duì)照治療組建立ALI模型（腹腔注射LPS5MGKG4－6H）后，以ADEGFP（341011VPML）腺病毒溶液500ULKG滴鼻作為對(duì)照。③FLIP預(yù)防組先予FLIP腺病毒500ULKG滴鼻預(yù)處理感染SD大鼠，48H后制備大鼠ALI模型；④對(duì)照預(yù)防組先予以ADEGFP腺病毒吸入作為預(yù)防對(duì)照，48后制備大鼠ALI模型。3觀察ADFLIP對(duì)肺組織FLIP表達(dá)的影響及ALIARDS的防治作用采用RTPCR和免疫組織化學(xué)染色方法檢測(cè)各組大鼠的肺組織FLIPMRNA及蛋白表達(dá)；觀察各組大鼠的一般情況、肺大體標(biāo)本、肺組織病理學(xué)改變，測(cè)定各組大鼠的肺呼吸膜的通透性以及肺損傷評(píng)分。4觀察各組大鼠的肺組織凋亡狀況透射電鏡下觀察各組大鼠Ⅱ型AEC、PVEC的凋亡狀況；提取肺組織DNA，瓊脂糖凝膠電泳觀察DNALADDER的形成；WESTERNBLOT和免疫組織化學(xué)染色法分別檢測(cè)各組大鼠的肺組織凋亡相關(guān)蛋白BAX和BCL2表達(dá)。結(jié)果1熒光顯微鏡下觀察結(jié)果提示ADEGFP腺病毒滴鼻吸入能明顯提升大鼠的肺組織EGFP黃綠色熒光的表達(dá)，其中48H表達(dá)最強(qiáng)。2FLIP治療組和FLIP預(yù)防組大鼠的肺組織FLIPMRNA和蛋白表達(dá)水平顯著高于其各自對(duì)照組（P3FLIP治療組和FLIP預(yù)防組大鼠的肺Ⅱ型AEC、PVEC凋亡的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，且無(wú)明顯的DNALADDER現(xiàn)象。肺組織凋亡相關(guān)蛋白BAX水平表達(dá)降低，而BCL2的表達(dá)上調(diào)（P結(jié)論通過(guò)滴鼻吸入的方法能夠使大鼠成功地感染ADFLIP，并提升其肺組織抗凋亡蛋白FLIP的表達(dá)水平；ADFLIP無(wú)論在制模前或制模后給予均能減輕LPS致大鼠ALI引起的肺水腫和肺血管通透性增高，提示對(duì)ALI起到防、治雙重作用，其機(jī)制可能是通過(guò)調(diào)節(jié)BAXBCL2比值，抑制Ⅱ型AEC、PVEC凋亡來(lái)實(shí)現(xiàn)的。本研究為ALIARDS的基因治療提供了新的思路。

簡(jiǎn)介：中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。論文作者簽名叢垂盤魚日期型￡中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容保密內(nèi)容除外，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名指導(dǎo)教師簽名中文論著摘要酵母雙雜交篩選與人巨細(xì)胞病毒ULL28兩種不同結(jié)構(gòu)相互作用蛋白目的人巨細(xì)胞病毒HUMANCYTOMEGALOVIRUS，HCMV是一種普遍存在的皰疹病毒，在人群中感染率為50％80％。正常人感染HCMV后表現(xiàn)為無(wú)癥狀的隱性或潛伏感染。而一旦人體的免疫機(jī)能發(fā)生重大變化時(shí)如妊娠、腫瘤、HIV感染、器官移植和新生兒等，HCMV即從潛伏感染活化為繼發(fā)性的增殖感染，引起嚴(yán)重的臨床癥狀甚至致死。同時(shí)HCMV感染還可引起間質(zhì)性肺炎、肝炎、腦炎、視網(wǎng)膜、腎、神經(jīng)系統(tǒng)、腸胃系統(tǒng)的疾病。隨著免疫低下人群患者的增多，HCIVIV感染及其引發(fā)的嚴(yán)重疾病致盲、致死日益受到關(guān)注。HCMV廣泛的致病性是由其病毒感染多種類型細(xì)胞的能力決定的。在免疫功能低下人群中HCMV感染的首要目標(biāo)為內(nèi)皮細(xì)胞和上皮細(xì)胞。研究證明HCMVULL31A128編碼蛋白是病毒在內(nèi)皮細(xì)胞中的復(fù)制及白細(xì)胞的播散過(guò)程中的重要決定因子。而我們?cè)谘芯恐邪l(fā)現(xiàn)ULL28ORFOPENINGREADINGFLAME具有兩個(gè)大小不同的片段，分別為519BP和642BP，我們將其命名為HCMVULL28519BP和HCMVULL28642BP，為了觀察兩個(gè)ORF片段所編碼蛋白的功能是否相同及其是否在HCMVULL31A128編碼蛋白感染內(nèi)皮及上皮細(xì)胞過(guò)程中發(fā)揮著各自不同的作用，故而利用酵母雙雜交系統(tǒng)從人胎腦CDNA文庫(kù)中篩選與HCMVULL28519BP和HCMVULL28642BP編碼蛋白相互作用的蛋白，這將為研究HCMVULL28基因在內(nèi)皮細(xì)胞感染嗜性中所發(fā)揮的作用及揭示HCMV先天感染致病機(jī)理、解決人巨細(xì)胞病毒先天感染的防治、減少先天畸形兒出生等醫(yī)學(xué)問(wèn)題奠定基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：目的①翻譯修訂版控制態(tài)度量表，使其適合中國(guó)文化背景下使用。②測(cè)評(píng)冠心病住院患者的感知控制水平，并探討影響冠心病住院患者感知控制的相關(guān)因素。③探討冠心病患者感知控制與焦慮、抑郁的相關(guān)性。④評(píng)價(jià)認(rèn)知行為干預(yù)對(duì)冠心病住院患者感知控制、焦慮及抑郁的影響。方法①翻譯英文版修訂版控制態(tài)度量表CASR，采用相關(guān)分析進(jìn)行項(xiàng)目篩選，采用因子分析、內(nèi)容效度指數(shù)進(jìn)行效度檢驗(yàn)以及CRONBACHSΑ系數(shù)、重測(cè)信度、分半信度進(jìn)行信度檢驗(yàn)，完善評(píng)價(jià)工具。②選取中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院符合入排標(biāo)準(zhǔn)的106例患者為研究對(duì)象，隨機(jī)分為對(duì)照組及干預(yù)組各53例。兩組均接受常規(guī)護(hù)理如觀察病情、心理護(hù)理、用藥護(hù)理、?？谱o(hù)理、健康教育等。干預(yù)組另給予以認(rèn)知重構(gòu)、問(wèn)題解決為主要技術(shù)的認(rèn)知行為干預(yù)共5次，每次20～40MIN。③應(yīng)用中文版CASR、焦慮自評(píng)量表SAS及抑郁自評(píng)量表SDS，于干預(yù)前、干預(yù)后及干預(yù)后3月測(cè)評(píng)冠心病患者感知控制、焦慮及抑郁水平。④采用SPSS130進(jìn)行T檢驗(yàn)，非參數(shù)檢驗(yàn)MANNWHITNEYU檢驗(yàn)，WILCOXON符號(hào)秩檢驗(yàn)和KRUSKALWALLISH檢驗(yàn)，多元線性回歸分析，構(gòu)成比、率間比較的X2檢驗(yàn)，SPEARMAN相關(guān)分析及重復(fù)測(cè)量資料方差分析。結(jié)果①CASR項(xiàng)目分析各條目得分與量表總分PEARSON相關(guān)系數(shù)在0539～0769之間CASR效度評(píng)價(jià)驗(yàn)證性因子分析顯示保留1個(gè)維度較適宜，CVI為0875CASR信度評(píng)價(jià)CRONBACHSΑ系數(shù)為0806，重測(cè)信度為0813，分半信度為0781。②冠心病住院患者CASR得分為2717±478分，合并癥數(shù)、NYHA分級(jí)、心肌梗死及性別是影響患者CASR得分的主要因素。③CASR得分與SAS、SDS得分呈負(fù)相關(guān)P＜001。④干預(yù)對(duì)CASR得分的影響對(duì)照組干預(yù)前后CASR得分差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＞005，而干預(yù)組干預(yù)后CASR得分高于干預(yù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005干預(yù)組干預(yù)后CASR得分增加的幅度大于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005CASR干預(yù)主效應(yīng)、時(shí)間主效應(yīng)及交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005。④干預(yù)對(duì)SAS得分及焦慮發(fā)生率的影響對(duì)照組及干預(yù)組干預(yù)后SAS得分均低于干預(yù)前，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005干預(yù)組干預(yù)后SAS得分下降的幅度大于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005SAS得分干預(yù)主效應(yīng)、時(shí)間主效應(yīng)及交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005干預(yù)組干預(yù)后焦慮發(fā)生率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。⑤干預(yù)對(duì)SDS得分及抑郁發(fā)生率的影響對(duì)照組與干預(yù)組干預(yù)后SDS得分低于干預(yù)前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005干預(yù)組干預(yù)后SDS得分下降的幅度大于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005SDS得分干預(yù)主效應(yīng)、時(shí)間主效應(yīng)及交互效應(yīng)均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P＜005干預(yù)后干預(yù)組抑郁發(fā)生率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜005）。結(jié)論①本研究翻譯的中文版修訂版控制態(tài)度量表CASR具有較好的信效度，適合在中國(guó)文化背景下使用，達(dá)到了心理測(cè)量學(xué)的要求。②冠心病住院患者感知控制水平較低，其與患者合并癥數(shù)、NYHA分級(jí)、心肌梗死及性別有關(guān)。③冠心病感知控制與焦慮、抑郁呈負(fù)性相關(guān)。④認(rèn)知行為干預(yù)可有效提升冠心病住院患者感知控制水平，這種效果在干預(yù)后3個(gè)月仍存在。認(rèn)知行為干預(yù)在一定程度上降低了冠心病住院患者焦慮、抑郁水平。

簡(jiǎn)介：呼吸道合胞病毒RESPIRATYSYNCYTIALVIRUSRSV感染可引起嬰幼兒發(fā)生嚴(yán)重的毛細(xì)支氣管炎、肺炎甚至死亡也是誘發(fā)兒童哮喘的重要危險(xiǎn)因素12。然而目前治療RSV感染尚無(wú)特異性抗病毒藥物3探尋一種既安全又有效可用于預(yù)防和或治療RSV感染的抗病毒藥物仍舊迫切需要。重組人干擾素Α1BRECOMBINANTHUMANINTERFERONΑ1BRHIFNΑ1B是一類由我國(guó)自主研制成功獲得我國(guó)生產(chǎn)批文的基因工程類正規(guī)藥品4目前主要應(yīng)用于慢性乙型肝炎、慢性丙型肝炎及某些惡性腫瘤的治療56具有明顯的抗病毒、抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)功能。然而關(guān)于RHIFNΑ1B治療兒童RSV感染僅限國(guó)內(nèi)報(bào)道缺乏正規(guī)統(tǒng)一的規(guī)范化治療指南且國(guó)內(nèi)多位專家共識(shí)7認(rèn)為“Α干擾素作為抗病毒治療常用藥物已有臨床使用經(jīng)驗(yàn)但尚無(wú)兒童霧化吸入推薦劑量其有效性也需進(jìn)一步證實(shí)”。本科RSV系列實(shí)驗(yàn)前期研究了RHIFNΑ1B霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠的作用8以及小兒病毒性肺炎患兒肌內(nèi)注射RHIFNΑ1B的安全性和耐受性4。前者研究發(fā)現(xiàn)霧化吸入RHIFNΑ1B12ΜG對(duì)RSV感染小鼠治療有效8后者研究發(fā)現(xiàn)在0320ΜGKG范圍內(nèi)肌內(nèi)注射RHIFNΑ1B對(duì)于小兒病毒性肺炎恢復(fù)期患兒耐受性良好無(wú)明顯毒副作用4。因此本實(shí)驗(yàn)研究RHIFNΑ1B多劑量、大劑量霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠的作用試圖進(jìn)一步探討RHIFNΑ1B對(duì)RSV感染小鼠的抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用。目的本實(shí)驗(yàn)旨在采用RHIFNΑ1B不同劑量霧化吸入和RHIFNΑ1B腹腔注射兩種方式對(duì)RSV感染小鼠進(jìn)行干預(yù)通過(guò)光鏡和透射電鏡觀察肺組織病變熒光定量RTPCR檢測(cè)肺組織RSV病毒載量流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血T淋巴細(xì)胞亞群和ELISA方法檢測(cè)血清細(xì)胞因子水平的方法探討RHIFNΑ1B對(duì)RSV感染小鼠的抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用為RHIFNΑ1B治療兒童呼吸道RSV感染的臨床用藥提供一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法1培養(yǎng)HEP2細(xì)胞增殖RSV收集病毒液。2提取病毒液RNA熒光定量RTPCR進(jìn)行鑒定。3鑒定其為RSV后測(cè)定病毒滴度TCID50。4將BALBC小鼠隨機(jī)分為10組每組10只分別為空白對(duì)照組1組、陰性對(duì)照組1組、RSV感染模型組1組、RHIFNΑ1B3125ΜG、125ΜG、25ΜG、50ΜG霧化吸入組4組、利巴韋林霧化吸入組1組、RHIFNΑ1B腹腔注射組1組、利巴韋林腹腔注射組1組。5RSV病毒液滴鼻成功建立RSV感染小鼠模型后按照分組連續(xù)給予各組小鼠霧化吸入或腹腔注射干預(yù)治療5天空白對(duì)照組除外。6于次日采集小鼠全血流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD3CD4與CD3CD8水平計(jì)算兩者比值。7分離小鼠血清ELISA檢測(cè)IFNΓ、IL4、IL17水平。8剖取小鼠肺組織制作HE染色切片光鏡下觀察小鼠肺組織病理學(xué)改變計(jì)算組織病理學(xué)評(píng)分。9制作電鏡超薄切片透射電鏡下觀察小鼠肺組織超微結(jié)構(gòu)改變。10熒光定量RTPCR檢測(cè)小鼠肺組織RSV病毒載量。11統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果1HEP2細(xì)胞培養(yǎng)及RSV增殖過(guò)程順利。2熒光定量RTPCR建立標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率262Y軸截距395相關(guān)系數(shù)0990基線范圍615閾值016即得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程式Y(jié)262X395。病毒液核酸檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性鑒定其為RSV可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。3根據(jù)REEDMUENCH公式計(jì)算得出RSV病毒液TCID501046。4RSV感染小鼠表現(xiàn)為不同程度的精神萎靡運(yùn)動(dòng)遲緩飲食減少呼吸急促毛發(fā)豎立無(wú)光澤部分表現(xiàn)有咳嗽及打噴嚏癥狀提示RSV感染小鼠模型建立成功。5光鏡下可見RSV感染模型組小鼠肺組織支氣管與細(xì)支氣管周大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)管腔內(nèi)大量分泌物滲出肺泡隔顯著增寬肺泡腔狹窄或消失肺泡腔內(nèi)可見紅細(xì)胞及淡紅色透明水腫液。RSV感染模型組小鼠肺組織病理學(xué)評(píng)分24600分±1342分與陰性對(duì)照組1600分±2191分和空白對(duì)照組0800分±1789分比較顯著升高差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P6透射電鏡下可見RSV感染模型組小鼠肺泡隔顯著增厚充血、出血、水腫明顯部分有肺實(shí)變表現(xiàn)肺泡腔縮小或消失腔內(nèi)可見紅細(xì)胞與壞死、脫落的細(xì)胞碎片等Ⅰ型肺泡上皮細(xì)胞為早期凋亡表現(xiàn)胞核異形改變核染色質(zhì)邊集凝聚胞質(zhì)內(nèi)吞飲小泡數(shù)量明顯降低次級(jí)溶酶體數(shù)量增多線粒體數(shù)量減少細(xì)胞表面微絨毛變性壞死雜亂分布膠原成分形成細(xì)胞連接疏松部分已經(jīng)完全脫落Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞少有早期凋亡表現(xiàn)胞核變化不大胞質(zhì)內(nèi)線粒體數(shù)量增多嗜鋨性板層小體數(shù)量增多分泌、胞吐現(xiàn)象活躍。RHIFNΑ1B不同劑量霧化吸入組可見小鼠肺組織炎性損傷程度明顯減輕。利巴韋林霧化吸入組可見程度不一的高電子密度致密物沉積現(xiàn)象連接成線狀或帶狀均勻分布于肺泡隔基底膜區(qū)域而RHIFNΑ1B霧化吸入組與2個(gè)腹腔注射組均未觀察到此類現(xiàn)象。7熒光定量RTPCR檢測(cè)結(jié)果顯示陰性對(duì)照組與空白對(duì)照組小鼠肺組織未檢出RSVRSV感染模型組小鼠肺組織RSV病毒載量最高153706±18982COPIESMG與其余各組間比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。8流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示RSV感染模型組小鼠外周血CD3CD4水平78820％±0973最高CD3CD8水平18020±1628最低兩者比值4404±0415顯著升高與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。9ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示RSV感染模型組小鼠血清IFNΓ水平最低39386PGML±11942PGMLIL4131241PGML±15388PGML與IL17132080PGML±17659PGML水平最高與陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P005。結(jié)論1RHIFNΑ1B霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠肺組織病毒載量具有良好的抑制作用。2RHIFNΑ1B霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠外周血T淋巴細(xì)胞亞群失衡具有良好的調(diào)節(jié)作用。3RHIFNΑ1B霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠血清IFNΓ、IL4和IL17水平具有良好的調(diào)節(jié)作用。4RHIFNΑ1B不同劑量霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠的抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用存在一定的劑量效應(yīng)關(guān)系。5RHIFNΑ1B50ΜG霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠的抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用最佳強(qiáng)于利巴韋林霧化吸入與RHIFNΑ1B腹腔注射。6RHIFNΑ1B腹腔注射與利巴韋林腹腔注射對(duì)RSV感染小鼠的抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用未見明顯差異。7首次研究RHIFNΑ1B多劑量、大劑量霧化吸入對(duì)RSV感染小鼠的抗病毒及免疫調(diào)節(jié)作用并與RHIFNΑ1B腹腔注射進(jìn)行療效對(duì)比為RHIFNΑ1B治療RSV感染的進(jìn)一步臨床應(yīng)用研究奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

簡(jiǎn)介：乙型腦炎病毒又稱日本腦炎病毒JAPANESEENCEPHALITISVIRUS，JEV，簡(jiǎn)稱乙腦病毒，隸屬于黃病毒科（FLAVIVIRIDAE）黃病毒屬FLAVIVIRUS。按照病毒全基因組或部分基因組序列可以將乙腦病毒分為5個(gè)基因型（基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ）。JEVGZ56毒株是我國(guó)于2006年首次從病毒性腦炎患者標(biāo)本中分離得到屬基因Ⅰ型的乙腦病毒。JEVXZ0934毒株是我國(guó)于2009年從西藏采集到的蚊子中獲得的屬基因Ⅴ型乙腦毒株，該毒株是繼馬來(lái)西亞于1952年從人患中分離獲得的屬基因Ⅴ型乙腦毒株MUAR后由我國(guó)第一次分離獲得的屬基因Ⅴ型乙腦病毒。本研究分別從兩只分別因感染JEVGZ56及XZ0934而致死的乳鼠腦部中分別獲得JEVGZ56及XZ0934毒株，并分別對(duì)其進(jìn)行空斑純化以期獲得純化的JEVGZ56及XZ0934毒株，進(jìn)而將這兩株純化的病毒設(shè)計(jì)為16個(gè)片段擴(kuò)增獲得它們的全基因組序列，從而通過(guò)現(xiàn)代分子生物學(xué)理論與技術(shù)測(cè)定和分析了這兩株病毒的全基因組序列特征，以了解它們的致病性分子基礎(chǔ)。本研究進(jìn)而將JEVXZ0934毒株的基因組全長(zhǎng)通過(guò)RTPCR法分段擴(kuò)增為兩兩疊搭的4個(gè)大片段，并分段克隆至具有多個(gè)限制性酶切位點(diǎn)的改造載體PACYCMCS上，以期利用反向遺傳學(xué)技術(shù)闡明該病毒的致病分子機(jī)理、研制重組病毒疫苗及開發(fā)基因工程載體。研究結(jié)果顯示JEVGZ56毒株的基因組全長(zhǎng)為10965NT，編碼3432個(gè)氨基酸。病毒全基因組分子進(jìn)化分析顯示JEVGZ56毒株的全基因組與國(guó)際上第一株從蚊蟲分離的基因Ⅰ型乙腦病毒（M28株）處于同一進(jìn)化分支。GZ56株與其它基因Ⅰ型乙腦病毒核苷酸和氨基酸序列同源性分別為962％～986％和982％～997％。病毒E基因與乙腦病毒滅活疫苗株P(guān)3相比存在11個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)，而與乙腦病毒減毒活疫苗株SA14142相比，在E蛋白上存在14個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)。JEVXZ0934毒株的基因組全長(zhǎng)為10983NT，編碼3432個(gè)氨基酸。病毒全基因組分子進(jìn)化分析顯示JEVXZ0934毒株的全基因組與國(guó)際上第一株從死患中分離的基因Ⅴ型乙腦病毒（MUAR株）處于同一進(jìn)化分支。XZ0934株與GENBANK中選擇的23株乙腦毒株全基因組序列比較發(fā)現(xiàn)，其核苷酸和氨基酸總體同源性分別為788％～907％和900％～983％其中，XZ0934株與MUAR株的核苷酸和氨基酸同源性分別為907％和983％與GZ56株的核苷酸和氨基酸同源性分別為794％和912％。病毒E基因與乙腦病毒滅活疫苗株P(guān)3相比存在47個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)，而與乙腦病毒減毒活疫苗株SA14142相比，在E蛋白上存在52個(gè)氨基酸差異位點(diǎn)。改造載體PACYCMCS構(gòu)建成功，其全長(zhǎng)為2467BP，具氨芐抗性且在多克隆位點(diǎn)MCS處具23個(gè)限制性內(nèi)切酶經(jīng)RTPCR擴(kuò)增所得的JEVXZ0934毒株的4個(gè)大片段的長(zhǎng)度分別為2418BP、3002BP、2607BP、2983BP且測(cè)序結(jié)果表明，該病毒的基因組全長(zhǎng)已連接至改造載體PACYCMCS上，所得PACYCMCSXZ0934的基因組全長(zhǎng)為13450BP。

簡(jiǎn)介：背景乙型肝炎病毒HEPATITISBVIRUS，HBV感染是世界范圍內(nèi)導(dǎo)致病毒相關(guān)性慢性肝臟疾病最常見的因?yàn)橹弧?jù)估計(jì)全世界約有3億慢性HBV攜帶者，我國(guó)的HBV感染者約為12億。慢性HBV感染可引起包括無(wú)癥狀攜帶、慢性乙型肝炎CHRONICHEPATITISB，CHB、肝硬化和肝癌，或進(jìn)展為肝衰竭LIVERFAILURE，LF的一系列肝臟疾病譜。慢加急性肝衰竭ACUTEONCHRONICLIVERFAILURE，ACLF是在慢性乙肝病毒感染基礎(chǔ)上，由于病毒復(fù)制、感染、內(nèi)毒素血癥及勞累飲酒等誘因，引起的肝臟急性炎癥加重，肝臟發(fā)生大塊或亞大塊壞死，導(dǎo)致病情急劇加重，引起肝衰竭。中國(guó)80％的ACLF患者與HBV感染相關(guān)。ACLF的死亡率很高，在未進(jìn)行肝移植的患者中高達(dá)6080％。在CHB基礎(chǔ)上進(jìn)展為肝衰竭的機(jī)制復(fù)雜，HBV病毒和機(jī)體免疫的因素都起著重要的作用。既往文獻(xiàn)報(bào)道HBV病毒變異，特別是前C區(qū)終止密碼了G1896A，PC和基本核心啟動(dòng)子BASIECEPROMOTER，A1762TG1764A，BCP的變異率在急性肝衰竭的患者中明顯升高；PC和BCP變異下調(diào)了作為免疫耐受原的HBEAG，血清中HBEAG下降或缺如，導(dǎo)致HBCAG表達(dá)增加，使TH1輔助細(xì)胞發(fā)動(dòng)細(xì)胞毒性T細(xì)胞CYTOXICTLYMPHOCYTE，CTL攻擊感染的肝細(xì)胞，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞壞死。HBCAG作為CTL靶抗原，包含有多個(gè)能被CTL識(shí)別的表位EPITOPE。表位是特異性細(xì)胞免疫應(yīng)答得以激發(fā)的主要原動(dòng)力，處于免疫識(shí)別和免疫激活的核心位置。核苷酸的轉(zhuǎn)換、插入和缺失可導(dǎo)致氨基酸的有義突變，當(dāng)這種突變影響到病毒的特異性T淋巴細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞表位的序列和序列構(gòu)象時(shí)，進(jìn)一步會(huì)影響與HLA分子的結(jié)合力或與B、T淋巴細(xì)胞受體的結(jié)合力，從而影響宿主針對(duì)病毒的免疫應(yīng)答能力。在一些腫瘤和其他病毒細(xì)胞免疫應(yīng)答方面，研究已證實(shí)基因變異會(huì)導(dǎo)致T細(xì)胞表位漂移EPITOPEDRIFT，從而改變了表位的免疫原性，進(jìn)而影響疾病的發(fā)展與預(yù)后。目的以中國(guó)廣東地區(qū)ACLF患者為主要對(duì)象，從HBV變異影響基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控和影響宿主免疫應(yīng)答兩個(gè)方面，探討病毒變異與ACLF患者發(fā)病的關(guān)系。方法39例ACLF患者和38例嚴(yán)重肝炎活動(dòng)患者SEVEREHEPATITISB，SHB作為主要研究對(duì)象。其中ACLF診斷標(biāo)準(zhǔn)在慢性肝病的基礎(chǔ)上急性起病，15天至26周出現(xiàn)以下臨床表現(xiàn)者①極度乏力，有明顯的消化道癥狀；②黃疸迅速加深，血清總膽紅素TB≥正常值上限10倍，或每日上升≥171ΜMOLL；③凝血酶原時(shí)間明顯延長(zhǎng)，凝血酶原活動(dòng)度PTA≤40％。SHB定義參照文獻(xiàn)的報(bào)道丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶ALT≥600UL、TB≥513ΜMOLL和PTA≤50％。作為對(duì)照組的44例CHB患者定義為HBV表面抗原HBSAG陽(yáng)性半年以上，出現(xiàn)的輕度或中度肝炎活動(dòng)，即ALT波動(dòng)于80400UL和TB≤171ΜMOL。以上患者臨床和實(shí)驗(yàn)室檢查均無(wú)明顯肝硬化征象。ACLF和SHB的患者平均隨訪106月最長(zhǎng)17個(gè)月，最短3個(gè)月。采集患者的臨床資料和血清標(biāo)本。抽提DNA，通過(guò)聚合酶鏈反應(yīng)POLYMERASECHAINREACTION，PCR擴(kuò)增和測(cè)序HBV前CC區(qū)，通過(guò)克隆測(cè)序的方法對(duì)HBV混合株感染加以驗(yàn)證。通過(guò)生物預(yù)測(cè)網(wǎng)站SYFPEITHI和BIMAS分析線性TH細(xì)胞表位和CTL表位發(fā)生變異后與HLA分子的結(jié)合能力，用HBCAGX線衍射3D結(jié)構(gòu)分析B細(xì)胞表位變異后構(gòu)型的改變。用五聚體染色PENTAMERSTAINING技術(shù)探討表位免疫原性的改變。結(jié)論1根據(jù)LOGISTIC回歸篩選與從SHB進(jìn)展為ACLF相關(guān)的因素包括TB升高和PTA降低。在ACLF中，PTA下降與不良結(jié)局相關(guān)。2基因B型在ACLF和SHB兩組比率均高于CHB組，且SHB組與CHB組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這表明在中國(guó)南方地區(qū)基因B型與嚴(yán)重的肝臟炎癥活動(dòng)發(fā)病相關(guān)。3BCPA1762TG1764A和PCG1896A變異率在ACLF組明顯高于CHB組。ACLF組HBV發(fā)生BCPPC和BCPPC的比例明顯高于CHB組，而BCPPC比例明顯低于CHB組。這個(gè)結(jié)果證實(shí)了A1762TG1764A和G1896A高變異與ACLF發(fā)病的相關(guān)性。4在BCPPC、BCPPC、BCPPC和BCPPC模式中HBEAG的陰性率逐步升高；而且BCPPC和BCPPC模式下調(diào)HBEAG的作用與其他兩種模式相比明顯增強(qiáng)；在單變異模式中PC變異下調(diào)HBEAG作用強(qiáng)于BCP變異；且在ACLF組BCPPC和PC單變異的比例明顯高于CHB組。這表明PC和BCPPC模式導(dǎo)致的HBEAG陰性與ACLF發(fā)病相關(guān)。5C基因編碼區(qū)發(fā)生變異的頻率在ACLF組明顯高于CHB組。ACLF中氨基酸變異率明顯升高的位點(diǎn)絕大部分位于表位區(qū)域。統(tǒng)計(jì)各個(gè)表位區(qū)變異的頻率，在ACLF組均高于CHB組。這說(shuō)明表位變異可能在ACLF發(fā)病中起著重要的作用。6AA5和AA60變異存在明顯的協(xié)同關(guān)系。兩位點(diǎn)盡管在線性位置相隔遠(yuǎn)，但在HBCAG空間構(gòu)型上位置相鄰，分享HBCAG四聚體中同一個(gè)螺旋束。通過(guò)預(yù)測(cè)分析肽段發(fā)生AA5PT的變異后與HLAA0201結(jié)合力增強(qiáng)；提示AA5變異后可能提高表位的免疫原性、誘導(dǎo)更強(qiáng)的免疫反應(yīng)；而AA5PT的變異在ACLF中明顯升高5263％；表明AA5T與ACLF的發(fā)病相關(guān)。AA60由于與AA5空間位置相鄰，可能在極性、PH值、親水性等多個(gè)因素的影響下，出現(xiàn)協(xié)同變異。7HLAA2限制性CTL表位HBCAG1827Ⅴ27在ACLF組的比率明顯升高，且隨訪后ACLF患者中，HLAA2陽(yáng)性的患者均變異127；且HBCAG1827Ⅴ27特異性CD8細(xì)胞的頻數(shù)高于HBCAG1827Ⅰ27特異性CD8細(xì)胞的頻數(shù)。這表明HBCAG182727Ⅴ在HLAA2陽(yáng)性患者中引起較強(qiáng)的免疫應(yīng)答，在清除了AA27Ⅴ病毒的同時(shí)，導(dǎo)致了肝臟炎癥的發(fā)生，與ACLF的發(fā)病相關(guān)。

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簡(jiǎn)介：目的運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法尋找慢性乙肝中醫(yī)肝腎陰虛證、脾腎陽(yáng)虛證患者外周血漿中差異表達(dá)的蛋白質(zhì)分析其與慢性乙肝中醫(yī)虛證證侯的對(duì)應(yīng)關(guān)系初步探索出慢性乙肝中醫(yī)虛證的蛋白質(zhì)組學(xué)規(guī)律為中醫(yī)臨床辨識(shí)慢性乙肝虛證提供可供參考的客觀化指標(biāo)最終為進(jìn)一步探討慢性乙肝中醫(yī)虛證的分子基礎(chǔ)提供線索。方法通過(guò)雙向凝膠電泳獲得正常對(duì)照組、肝腎陰虛證組、脾腎陽(yáng)虛證組的血漿蛋白質(zhì)TWODIMENSIONALELECTROPHESIS2DE圖譜經(jīng)質(zhì)譜分析鑒定出差異表達(dá)的蛋白質(zhì)。具體方法依據(jù)病毒性肝炎中醫(yī)辨證標(biāo)準(zhǔn)在瀘州醫(yī)學(xué)院附屬中醫(yī)醫(yī)院2008年5月～2009年8月期間的住院和門診慢性乙肝患者中收集典型的肝腎陰虛證、脾腎陽(yáng)虛證及健康正常人各三例作為研究對(duì)象對(duì)其血漿蛋白進(jìn)行雙向凝膠電泳。第一向采用PH47的固相PH梯度膠條IMMOBILIZEDPHGRADIENTSIPG等電聚焦ISOELECTROFOCUSINGIEF第二向采用濃度為12％的十二烷基磺酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳SODIUMDODECYLSULPHATEPOLYACRYLAEGELELECTROPHESISSDSPAGE。硝酸銀染色后并經(jīng)凝膠圖像采集系統(tǒng)獲得血漿蛋白質(zhì)2DE圖譜采用IMAGEMASTER2DPLATINUMV50軟件對(duì)組內(nèi)及組間的圖譜對(duì)比分析依據(jù)IPG膠條的固相PH梯度中等電點(diǎn)PI線性梯度和標(biāo)準(zhǔn)分子量MARKER確定各蛋白點(diǎn)的相對(duì)分子量DA、相對(duì)等電點(diǎn)PI將實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的雙向電泳結(jié)果出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)化總灰度值％VOL相差達(dá)2倍以上的蛋白點(diǎn)視為差異表達(dá)蛋白質(zhì)切取相應(yīng)的差異表達(dá)蛋白點(diǎn)作質(zhì)譜分析搜索SWISSPROT數(shù)據(jù)庫(kù)鑒定出各差異表達(dá)的蛋白質(zhì)初步建立起差異表達(dá)的蛋白質(zhì)與慢性乙肝虛證的對(duì)應(yīng)關(guān)系。結(jié)果1各組血漿蛋白2DE圖譜中大多數(shù)蛋白點(diǎn)分布在P14565分子量2590KD的范圍內(nèi)。經(jīng)IMAGEMASTER2DPLATINUMV50軟件分析各組均可獲得重復(fù)性穩(wěn)定的蛋白點(diǎn)約450±100個(gè)。2慢性乙肝中肝腎陰虛證組的2DE圖譜與正常組對(duì)比表現(xiàn)為蛋白點(diǎn)4、7表達(dá)量明顯升高蛋白點(diǎn)3、8、9表達(dá)量明顯下降。經(jīng)質(zhì)譜分析鑒定并結(jié)合SWISSPROT蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)得出蛋白點(diǎn)4為C反應(yīng)蛋白CREACTIVEPROTEINCRP、蛋白點(diǎn)7為甲狀腺素結(jié)合蛋白THYROXINEBINDINGPROTEINTTR、蛋白點(diǎn)3為載脂蛋白A2APOA2、蛋白點(diǎn)8、9為同一蛋白結(jié)合珠蛋白HAPTOGLOBINHP。3慢性乙肝中脾腎陽(yáng)虛證組的2DE圖譜與正常組對(duì)比表現(xiàn)為蛋白點(diǎn)1、2、3、7、8、9表達(dá)量明顯下降蛋白點(diǎn)5、6表達(dá)量明顯升高。經(jīng)質(zhì)譜分析鑒定并結(jié)合SWISSPROT蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)得出蛋白點(diǎn)1為載脂蛋白C2APOC2、蛋白點(diǎn)2為血清淀粉蛋白PSERUMAMYLOIDSAP、蛋白點(diǎn)3為APOA2、蛋白點(diǎn)7為甲狀腺素結(jié)合蛋白TTR、蛋白點(diǎn)8、9為同一蛋白結(jié)合珠蛋白HP、蛋白點(diǎn)5、6為同一蛋白血漿視黃醇結(jié)合蛋白PLASMARETINOLBINDINGPROTEINRBP。4歸納總結(jié)慢性乙肝中醫(yī)二虛證與正常對(duì)照組2DE圖譜發(fā)現(xiàn)慢性乙肝中醫(yī)二虛證與正常人相比存在明顯的規(guī)律性差異表現(xiàn)為蛋白點(diǎn)3、8、9分別為APOA2、HP表達(dá)量均明顯下降。結(jié)論1成功建立起慢性乙肝肝腎陰虛證組、脾腎陽(yáng)虛證及正常對(duì)照組血漿蛋白質(zhì)組2DE圖譜。2慢性乙肝中肝腎陰虛證組除了APOA2、HP明顯下降外還表現(xiàn)CRP、TTR表達(dá)量明顯升高而在正常人和脾腎陽(yáng)虛證組中均未體現(xiàn)推測(cè)CRP、TTR表達(dá)量的升高參與了慢性乙肝中肝腎陰虛證侯的形成機(jī)制。進(jìn)一步深入研究可望為臨床該證型的診斷提供客觀化分子指標(biāo)。3慢性乙肝中脾腎陽(yáng)虛證組除了APOA2、HP表達(dá)量明顯下降外還表現(xiàn)為APOC2、SAP、TTR表達(dá)量明顯下降RBP表達(dá)量明顯升高推測(cè)這些蛋白質(zhì)表達(dá)量的變化可能與慢性乙肝中脾腎陽(yáng)虛證的病理機(jī)制相關(guān)。臨床通過(guò)對(duì)慢性乙肝患者血漿蛋白質(zhì)組的篩查可能為臨床該證型的診斷找到客觀化分子診斷指標(biāo)。4歸納總結(jié)慢性乙肝中醫(yī)二虛證與正常對(duì)照組之間2DE圖譜相比存在明顯的規(guī)律性差異表現(xiàn)為APOA2、HP表達(dá)量均明顯下降提示慢性乙肝中醫(yī)二虛證具有相同的蛋白質(zhì)變化規(guī)律推測(cè)這些相同的蛋白質(zhì)變化可能與慢性乙肝各中醫(yī)虛型證型的形成機(jī)制有關(guān)。通過(guò)進(jìn)一步深入研究可望為臨床慢性乙肝虛證的診斷提供客觀的分子指標(biāo)。

簡(jiǎn)介：貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2013屆碩士論文中國(guó)圖書資料分類法分類號(hào)R7431單位代碼10660學(xué)號(hào)S100285貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院20132013屆臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論臨床醫(yī)學(xué)碩士專業(yè)學(xué)位論文血壓晝夜節(jié)律與腦白質(zhì)疏松及認(rèn)知功能的相關(guān)性研究臨床論文部分臨床論文部分研究生胡媛導(dǎo)師劉芳教授年級(jí)2010級(jí)專業(yè)神經(jīng)病學(xué)2013年5月10日貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院2013屆碩士論文2血壓晝夜節(jié)律與腦白質(zhì)疏松及認(rèn)知功能的相關(guān)性研究專業(yè)神經(jīng)病學(xué)研究生胡媛導(dǎo)師劉芳教授摘要摘要目的探討血壓晝夜節(jié)律變化特點(diǎn)與腦白質(zhì)疏松發(fā)生及認(rèn)知功能障礙的相關(guān)性，為尋找腦白質(zhì)疏松、認(rèn)知功能損害因素提供臨床基礎(chǔ)依據(jù)。方法對(duì)以頭昏、眩暈就診的患者行動(dòng)態(tài)血壓監(jiān)測(cè)，根據(jù)血壓晝夜節(jié)律的特點(diǎn)分為為杓型、非杓型、反杓型、深杓型四組，結(jié)合影像學(xué)腦白質(zhì)疏松有無(wú)及輕、中、重度的評(píng)定，及MOCA、MMSE及ADL等神經(jīng)心理學(xué)量表的檢測(cè)，同時(shí)記錄相關(guān)危險(xiǎn)因素資料，對(duì)資料用相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行分析。結(jié)果1在腦白質(zhì)疏松危險(xiǎn)因素的回歸分析顯示，異常晝夜血壓節(jié)律、高血壓史、糖尿病史、高膽固醇血癥、頸部血管斑塊等因素與之有關(guān)P005。2異常晝夜血壓節(jié)律各組非杓型、反杓型、深杓型）的白質(zhì)疏松發(fā)生率較杓型血壓節(jié)律組高（P001）。白質(zhì)疏松分度后發(fā)現(xiàn)，中度白質(zhì)疏松發(fā)生百分率在異常晝夜血壓節(jié)律組出現(xiàn)率最高，重度白質(zhì)疏松發(fā)生百分率深杓型組明顯高于其它三組，差異有顯著性P005。3在MMSE、MOCA、ADL評(píng)分的比較中異常血壓節(jié)律各組的MMSE、MOCA評(píng)分較杓型組低P005，尤以反杓型、深杓型組明顯；在ADL評(píng)分中，深杓型組受損最為明顯，與杓型組比差異有顯著性P005。4白質(zhì)疏松患者中異常晝夜血壓節(jié)律各組出現(xiàn)MOCA≦25分的百分率均較正常杓型血壓節(jié)律組高P001。5腦白質(zhì)疏松患者M(jìn)OCA量表各分項(xiàng)目比較，在視空間執(zhí)行功能、注意力、及延遲回憶中，異常血壓節(jié)律各組減退較杓型組明顯P005，其中反杓型、深杓型最甚。結(jié)論1異常晝夜血壓節(jié)律是腦白質(zhì)疏松危險(xiǎn)因素。2血壓節(jié)律異常患者的白質(zhì)疏松發(fā)生率較高。3異常晝夜血壓節(jié)律的認(rèn)知功能評(píng)分較正常杓型組低，其中反杓型、深杓型明顯。白質(zhì)疏松患者中異常血壓節(jié)律組出現(xiàn)輕度認(rèn)知功能障礙例數(shù)較正常杓型組多。4白質(zhì)疏松患者M(jìn)OCA量表項(xiàng)目分值的比較中，異常血壓節(jié)律在視空間執(zhí)行功能、注意力、及延遲回憶方面較杓型組減退，反杓型、深杓型明顯。關(guān)鍵詞關(guān)鍵詞血壓晝夜節(jié)律腦白質(zhì)疏松認(rèn)知功能障礙

簡(jiǎn)介：腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子BRAINDERIVEDNEUROTROPHICFACT，BDNF是腦內(nèi)廣泛存在的一種蛋白質(zhì)，由腦組織合成，主要存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，尤以上丘腦、海馬、大腦皮層和紋狀體部位含量最高。BDNF在中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中起重要作用，能夠維持多種神經(jīng)元的存活、分化及生長(zhǎng)發(fā)育，并促進(jìn)受損神經(jīng)元的恢復(fù)與再生，對(duì)突觸間經(jīng)典遞質(zhì)的釋放有增強(qiáng)作用，影響神經(jīng)元的可塑性。研究發(fā)現(xiàn)，BDNF含量和分布的變化與很多神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制有很大關(guān)系，且向腦內(nèi)補(bǔ)充外源性BDNF對(duì)神經(jīng)退行性疾病有治療作用。血腦屏障BLOODBRAINBARRIER，BBB主要由腦毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞BRAINMICROVULARENDOTHILIALCELLS，BMECS及其之間的緊密連接組成，若外源性物質(zhì)要通過(guò)BBB必須滿足兩個(gè)條件1）分子量必須小于500DA2）脂溶性高。由于BDNF屬于大分子陽(yáng)離子蛋白質(zhì)，外源性BDNF很難通過(guò)血腦屏障而發(fā)揮作用，因此，如何將外源性BDNF蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)入腦仍是一項(xiàng)挑戰(zhàn)。迄今為止，克服BBB的中樞系統(tǒng)給藥方法包括兩類其一是侵入性給藥方法包括腦內(nèi)定位注射、腦室內(nèi)或海馬穿刺給藥、腦部移植工程化細(xì)胞等，然而該類方法因其缺點(diǎn)藥物很快被組織清除、不易擴(kuò)散、濃度梯度大、技術(shù)要求高、風(fēng)險(xiǎn)大等而不能應(yīng)用于臨床。其二是非侵入性給藥方法該類方法通過(guò)載體的介導(dǎo)將生物大分子轉(zhuǎn)運(yùn)入腦，其具有高效、低毒、安全、方便等優(yōu)點(diǎn)。將蛋白質(zhì)或多肽載體與外源性大分子物質(zhì)通過(guò)基因工程的方法連接，在工程菌中表達(dá)融合蛋白，可以實(shí)現(xiàn)載體協(xié)助大分子物質(zhì)進(jìn)行入腦轉(zhuǎn)運(yùn)?？袢《咎堑鞍識(shí)ABIESVIRUSGLYCOPROTEIN，RVG具有嗜神經(jīng)性，能夠攜帶其他物質(zhì)向中樞神經(jīng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)。序列分析顯示，RVG上的189214和330357氨基酸序列是病毒與神經(jīng)元連接的關(guān)鍵部位，我們將330357這段序列與含九個(gè)精氨酸的膜轉(zhuǎn)導(dǎo)肽CELLPERATINGPEPTIDES，CPPS通過(guò)3個(gè)甘氨酸連接后形成RVG衍生肽RVGDERIVEDPEPTIDERDPKSVRTWNEIIPSKGCLRVGGRCHPHVNGGGRRRRRRRRR。RDP能夠攜帶多種大分子蛋白質(zhì)穿過(guò)血腦屏障并發(fā)揮生物學(xué)作用。本文試圖通過(guò)基因工程的方法將RDP基因與BDNF基因融合并在大腸桿菌中誘導(dǎo)表達(dá)，將融合蛋白經(jīng)尾靜脈注射入小鼠體內(nèi)，通過(guò)ELISA法檢測(cè)RDP介導(dǎo)的BDNF蛋白在小鼠體內(nèi)的分布，采用MRIS水迷宮的方法探究RDPBDNF對(duì)東莨菪堿所致認(rèn)知障礙模型小鼠的作用，并研究其作用機(jī)理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，重組的RDPBDNF能夠跨血腦屏障并發(fā)揮其神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)活性，能改善東莨菪堿誘導(dǎo)的認(rèn)知功能障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其作用機(jī)制可能與提高認(rèn)知障礙模型小鼠腦內(nèi)BDNF水平，從而增強(qiáng)膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)的功能及維持氧化應(yīng)激狀態(tài)平衡有關(guān)。