簡介：成語屬于非直義語言的一種，以“四字格”為基本形式，是“人們長期以來習用，形式簡潔而意思精辟的、定型的詞組或短句”，具有結構固定性、語言文言性、意義完整性和語言書面性的特點。影響成語認知的因素有詞頻、熟悉度、透明度等岡素，其中表象性作為影響成語認知的一個因素，一直以來很少得到研究。表象指的是“人們對感知過的事物形象的反映，是事物不在眼前時關于事物的心理復現(xiàn)”，具有直觀形象性和概括性兩個基本特征，包括視覺表象、聽覺表象等。本研究認為在對高表象性的成語進行加工時，同時激活了言語編碼系統(tǒng)和表象編碼系統(tǒng)，而對低表象性的成語進行加工時，只激活了言語編碼系統(tǒng)，因而高表象性成語的加工速度比低表象性成語的加工速度更快，更容易被識別。本研究通過三個實驗來考察影響成語加工的認知機制。實驗一采用內(nèi)隱任務，即將成語和非成語混合呈現(xiàn)，讓被試對呈現(xiàn)的四字組合進行是否是成語的判斷。實驗二采用外顯任務，讓被試對呈現(xiàn)的成語進行表象性判斷。實驗三結合ERP技術，探究成語認知加工的神經(jīng)機制。在三種實驗條件下，高表象性成語的反應時均比低表象性成語的反應時短。同時，實驗三還發(fā)現(xiàn)，成語和非成語均引發(fā)了N200（170230MS），且兩者的波幅沒有顯著差異。與成語相比，非成語引發(fā)了更負的N400350450MS和更正的LPC（（晚正復合體）420600MS），兩者差異顯著。與高表象性的成語相比，低表象性的成語引發(fā)了增強的N400350450MS和LPC420600MS，這些結果可以用雙重編碼理論來解釋，在進行詞匯判斷任務時，高表象性的成語存在表象編碼和言語編碼兩種編碼方式，使得被試能夠很快地從低表象性的成語和非成語中區(qū)分出來高表象性的成語，而低表象性的成語只有言語編碼一種編碼方式，使得其比高表象性的成語加工需要更多地認知資源，需要被試投入更多努力，因此導致其識別時間加長，引發(fā)增強的N400和LPC。通過實驗發(fā)現(xiàn)，表象性也是影響成語加工的重要因素。

簡介：四川大學博士學位論文CD40配體重組腺病毒聯(lián)合5FU抗腫瘤效應的實驗研究姓名吳紅兵申請學位級別博士專業(yè)腫瘤學指導教師魏于全20060501●●●朋川大學臨床醫(yī)學博士專業(yè)學位論文CD40配體重組腺病毒聯(lián)合5一FU抗腫瘤效應的實驗研究研究生吳紅兵導師魏于全教授中文摘要目的惡性腫瘤的治療目前仍以手術治療、化療和放療為主，而生物治療與化療相結合韻生物一化療模式是目前綜合治療的發(fā)展方向之一。以免疫細胞靶向的基因治療策略是當前臨床研究的熱點。CD40配體CD40L是腫瘤壞死因子N盯超家族中較重要的成員之一，與其受體CD40特異性結合發(fā)揮生物學效應。CD40LCD40是一對重要的共刺激分子，參與機體的體液和細胞免疫，在腫瘤免疫、直接殺傷腫瘤細胞、炎癥等病理反應中起重要作用。5一氟尿嘧啶5FU是干擾腫瘤細胞RNA功能，阻止腫瘤細胞DNA合成的抗代謝類藥物。本研究通過構建重組CD40L腺病毒聯(lián)合化療藥物5FU，觀察在小鼠腹腔腫瘤模型中能否產(chǎn)生更強的抗腫瘤效應并對其作用機制進行了初步分析。方法1將小鼠MCD40L或人HCD40L基因克隆到穿梭載體PSHUTTLE質(zhì)粒中，得到PSHUTTLEMCD40L和PSHUTTLEHCD40L，并分別將其線性化后與腺病毒骨架質(zhì)粒PADEASY1在大腸桿菌BJ5183中共轉化。2將腺病毒質(zhì)粒PACI酶切后，經(jīng)LIPOFEETAMINE脂質(zhì)體包裹轉染293細胞，2周后得到包裝重組腺病毒ADMCD40L和ADHCD40L，經(jīng)PCR、WESTENBLOT鑒定后大量擴增、純化病毒并測定其感染滴度。3流式細胞術檢測重組腺病毒ADMCD40L聯(lián)合化療藥5FU，誘導體

簡介：目的觀察雙黃連抗柯薩奇B病毒感染新生大鼠原代心肌細胞的效應并初步探討其機制結果高濃度的雙黃連05MGML對新生大鼠原代心肌細胞有毒性作用050MGML025MGML0125MGML雙黃連能夠顯著抑制柯薩奇B病毒對新生大鼠原代心肌細胞的CPE降低細胞上清液的病毒滴度減少感染心肌細胞肌酸磷酸激酶的釋放分別和病毒對照組相比P病毒感染的新生大鼠原代心肌細胞的CPE其主要作用環(huán)節(jié)在細胞外機制可能與阻止病毒吸附有關

簡介：安徽醫(yī)科大學碩士學位論文5歲以下兒童輪狀病毒腹瀉流行特征和G、P血清型分型研究姓名宋曉波申請學位級別碩士專業(yè)兒少衛(wèi)生與婦幼保健學指導教師陶芳標吳金貴20030401圭竺墾壁壟蘭塑主堂壘笙查一結論輪狀病毒感染是蘇州和馬鞍山5歲以下兒童急性腹瀉的主要致病原因之一，男女兒童感染率無明顯性別差異，血清型G型是優(yōu)勢株，不常見的G3型為蘇州輪狀病毒優(yōu)勢株，G9型出現(xiàn)認為可能與動物密切接觸有關，健康教育是預防嬰幼兒輪狀病毒持續(xù)性腹瀉的有效措施之一，在3～5個月齡進行輪狀病毒疫苗免疫預防，可能減少輪狀病毒持續(xù)性腹瀉的發(fā)病。關鍵詞輪狀病毒血清型持續(xù)性腹瀉危險因素流行病學

簡介：點擊查看更多E型沙眼衣原體MOMP基因重組腺病毒及其轉染樹突狀細胞的免疫效果研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：目的了解廣州地區(qū)不同流行年代登革病毒1型的分子流行病學特征、追蹤傳播來源；探討我國廣州地區(qū)登革病毒流行是否本地化，同時為登革疫苗研究篩選候選疫苗毒株提供一個重要依據(jù)。方法依據(jù)廣州地區(qū)登革病毒1型的流行規(guī)模，選取流行規(guī)模最大的GZ0195、其次GZ0102，流行規(guī)模最小的GZ0104及2006年新出現(xiàn)的毒株GZ1706進行研究，利用PRIMER50軟件參考登革病毒L型的標準株SIN27590設計引物，應用RTPCR技術分別擴增GZ0102、GZ0104、GZ1706流行株的E和NS1全基因，利用RTPCR和RACERAPIDAMPLIFICATIONOFCDNAENDS技術對GZ0195株全基因組序列進行擴增，獲得的目的基因分別克隆到PGEMTEASY載體并轉化DH5Α宿主菌，經(jīng)藍白斑篩選、PER和酶切鑒定陽性后進行序列測定。對測序結果應用DNASTAR軟件進行拼接，利用DNASTAR軟件包中的PROTEAN程序分別進行氨基酸序列預測。BLAST比對選取同源性較高的毒株及基因型的代表株，用C1USTALX183軟件進行多重比對，應用MEGA30軟件中的NJ、ME、MP和UPGMA四種方法進行構建系統(tǒng)發(fā)生樹。重組分析、計算遺傳距離、同意義性突變率和非同意義性突變率，并以6﹪的核苷酸差異DIVERGENCE作為基因分型的標準。結果1四株登革病毒1型DEN1GZ0195、GZ0102、GZ0104和GZ1706株E基因序列全長均為1485BP，編碼495個氨基酸；核苷酸序列同源性在91﹪984﹪之間，推導的氨基酸序列同源性在96﹪992﹪之間。進化分析顯示GZ0195、GZ0102、GZ0104株屬于基因Ⅳ型或南太平洋型，而GZ1706株屬于基因Ⅰ型或亞洲型。E蛋白毒力位點分析發(fā)現(xiàn)四株DEN1的E蛋白的兩個糖基化位點均沒有缺失，在E44E和E156T毒力位點四株病毒均沒有改變，在E366N→S和E蛋白Ⅲ區(qū)毒力位點分析僅GZ0195株的氨基酸發(fā)生了改變。2四株DEN1的NS1基因全長均為1056BP、編碼352個氨基酸，核苷酸序列同源性在91﹪972﹪之間，推導的氨基酸序列同源性在97﹪99﹪之間。進化分析顯示GZ0195和IGZ0102株仍屬于基因Ⅳ型即南太平洋型，GZ1706株也和E基因的分析一樣屬于基因Ⅰ型即亞洲型，而GZ0104株卻和E基因的分析不同而屬于基因Ⅰ型。NS1蛋白毒力位點分析顯示四株DEN1在NS1130和NS1207兩個糖基化位點都沒有缺失，僅GZ0195株在B細胞表位NS1111116區(qū)NS1103發(fā)生了改變T→M。3利用ENS1連接區(qū)240BP序列構建系統(tǒng)發(fā)生樹顯示GZ0195、GZ0102和GZ1706株基因分型結果同E和NS1基因的進化分析，GZ0195株屬于基因Ⅳ型或南太平洋型SP1和1995年以前印度尼西亞INDO88株同源性最高，推斷1995年廣州地區(qū)登革病毒1型的流行可能是印度尼西亞毒株的輸入；GZ0102株和澳大利亞1983、2000年流行的毒株遺傳距離最近，并且也屬于基因Ⅳ型或南太平洋型SP2，所以2002年廣州地區(qū)登革病毒1型的流行很可能和澳大利亞流行株有關；GZ1706株都屬于基因Ⅰ型或亞洲型，和ZJ04、泰國2001、泰國2002年流行的毒株都在同一個分枝上且和泰國流行的THAI01、THAI02株同源性均最高，提示廣州地區(qū)2006年流行的登革病毒1型可能來自泰國毒株的輸入。4GZ0104株的ENS1連接區(qū)240BP和NS1基因的分析一致屬于基因I型，重組分析發(fā)現(xiàn)GZ0104株是進化過程中來自兩個不同世系的重組株，一個世系來自廣州地區(qū)分離株GZ0102株屬于基因Ⅳ型，另一個世系是我國福建2004年分離株FJ23404屬于基因Ⅰ型。5GZ0195株全基因組序列全長10735BP，9510271為F區(qū)編碼3392個氨基酸。編碼區(qū)CDS的進化分析顯示1995年廣州地區(qū)流行的毒株仍屬于基因Ⅳ型和1995年以前印度尼西亞INDO88株同源性最高975﹪，和E、NS1、ENS1基因分析的結果一致；和GZ0195株同在一個進化分支上的還有印度洋國家塞舌爾2003年和2004年、大洋洲國家密克羅尼西亞2004年及南非地區(qū)留尼旺島2004年流行的登革病毒1型毒株，并且同源性在96﹪978﹪之間，提示廣州地區(qū)1995年流行的毒株一直在東南亞、大洋洲、印度洋和南非地區(qū)流行。5UTRDODCODINGREGIONS區(qū)有94個核苷酸，GZ0195株和同源性最高的IND088株比較僅有一個核苷酸的差異，在26位上GZ0195株A一G，導致GZ0195株二級結構在第2030位這段堿基序列形成了2個小環(huán)。3UTR區(qū)有462個核苷酸，GZ0195株和IADO88株有13個核苷酸的差異，突變多發(fā)生在NS5終止密碼子之后的高變區(qū)HBV，均有保守的RCS2、CS2結構，3末端形成長發(fā)夾結構3LSH，但GZ0195株在3LSH的莖上凸出一個環(huán)。毒力位點分析顯示GZ0195株在E、NS1、NS5、3UTR的毒力位點都發(fā)生了變異。結論本論文對登革病毒1型的進化分析表明廣州地區(qū)不同年份流行的登革病毒1型的基因分型不同，廣州地區(qū)登革病毒的流行沒有地域性的限制，并且不同年代流行的毒株核酸有較大的差異，與各毒株同源性最高的毒株均為國外不同的流行株，因此推斷廣州地區(qū)1995、2002、2004和2006年流行的登革病毒1型可能來自境外不同的疫源地。近十多年來廣州地區(qū)幾乎每年都有登革病毒的流行且大部分是DEN1，本論文的進化分析仍沒有發(fā)現(xiàn)廣州地區(qū)成為登革病毒疫源地的可靠證據(jù)。GZ0195株的CDS區(qū)進化分析發(fā)現(xiàn)該世系的毒株一直在東南亞、大洋洲、印度洋和南非地區(qū)流行，毒力位點分析顯示1995年流行株在E、NS1、NS5、3UTR的位點都可能發(fā)生了毒力變異，因此GZ0195株在登革病毒1型中有著重要的代表意義。

簡介：目的通過測定病毒性腦炎患兒治療前血清、腦脊液和治療后血清白細胞介素6IL6、腫瘤壞死因子ΑTNFΑ、胰島素樣生長因子1IGF1的濃度觀察IL6、TNFΑ和IGF1在病毒性腦炎患兒中的變化探討其在病毒性腦炎患兒發(fā)病中的作用為尋找有效的臨床治療方案提供理論依據(jù)方法對25例病毒性腦炎患兒分為重癥組15例和輕癥組10例采用ELISA法測定兩組患兒治療前血清、腦脊液及治療后血清中的IL6、TNFΑ和IGF1的水平并與正常對照組10例比較應用SPSS100軟件統(tǒng)計分析采用中位數(shù)MANNWHINEY檢驗SPEARMAN作相關分析P005無統(tǒng)計學意義結論病毒性腦炎患兒治療前血清和腦脊液IL6和TNFΑ水平顯著升高病情越重升高越明顯免疫因素參與了病毒性腦炎的發(fā)病過程IGF1在病毒性腦炎患兒腦脊液中升高血清中降低病情越重變化越明顯IGF1對病毒性腦炎患兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)可能具有保護作用

簡介：點擊查看更多血清淀粉樣蛋白A在慢性丙型肝炎病毒感染者中的表達及其臨床意義.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：點擊查看更多攜帶CARex和PTDtat的重組5型腺病毒的獲得及其對日本血吸蟲童蟲感染效率的研究.pdf精彩內(nèi)容。

簡介：持久性有毒物質(zhì)PERSISTENTTOXICSUBSTANCES，PTSS能夠抵抗光分解、化學分解和生物降解作用，通過大氣、淡水和海洋的流動發(fā)生遠距離乃至全球范圍的擴散轉移，表現(xiàn)為持久而廣泛地分布于自然界中，同時具有高疏水性特征，并且能夠在生物體內(nèi)形成富集，干擾機體內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能，影響體內(nèi)激素的合成、釋放、轉運、代謝及結合等過程，干擾血漿中正常激素水平的維持，對機體的生殖發(fā)育障礙、腫瘤發(fā)生、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等多方面產(chǎn)生影響；而且此類物質(zhì)可以通過食物鏈產(chǎn)生生物放大效應。目前，對PTSS的關注已經(jīng)由原來的僅僅是自然環(huán)境、野生生物而擴大到今天的人類健康。針對三峽水庫蓄水后，重慶地區(qū)水環(huán)境發(fā)生巨大變化，據(jù)前期曹佳、舒為群教授等研究發(fā)現(xiàn)長江、嘉陵江優(yōu)勢污染物鄰苯二甲酸二丁酯DIBUTYLPHTHALATE，DBP最高濃度達948ΜGL，而從主城區(qū)5個自來水廠出廠水中共檢測出82種有機污染物，其中以嘉陵江為水源的出廠水檢測出63種，以長江為水源的出廠水檢測出30種，對污染狀況與人群健康的研究刻不容緩。為深入了解現(xiàn)階段PTSS污染的狀況及其對健康的遠期危害，以及了解人群健康效應的變化狀況，故而我們分別從實驗室在細胞和分子水平觀察三峽庫區(qū)水優(yōu)勢污染物鄰苯二甲酸二丁酯的神經(jīng)細胞毒性效應，并且深入人群研究，觀察環(huán)境因素與兒童行為認知發(fā)育異常的相關關系，為促進人群健康提供科學依據(jù)。方法1實驗室研究1體外培養(yǎng)神經(jīng)細胞株PC12細胞，培養(yǎng)基分別含有5，125，25，50，100，200MGLDBP，作用24，48，72和96小時后，用細胞計數(shù)CCK8法檢測細胞的存活和生長；臺盼藍拒染法繪制生長曲線；2乳酸脫氫酶LDH，LACTATEDEHYDROGENASE釋放檢測細胞損傷程度；DNTB法測定谷光苷肽過氧化物酶GSHPX，GLUTATHIONEPEROXIDASE活性，丙二醛比色法測定丙二醛MDA，MALONDIALDEHYDE含量；3DNA凝膠電泳檢測神經(jīng)細胞凋亡。4RTPCR檢測P53，BCL2，BAX等凋亡相關基因表達變化情況。2流行病學研究以24例行為認知發(fā)育異常兒童為病例、96名行為認知發(fā)育正常兒童為對照，進行1∶4匹配病例對照研究。病例和對照均來自重慶市婦幼保健院兒童保健科常規(guī)保健兒童。同時，按病例對照分組隨機抽樣獲取10％兒童，進行外環(huán)境暴露因素測量。數(shù)據(jù)處理采用條件LOGISTIC回歸進行統(tǒng)計分析。結果1實驗室研究CCK8檢測結果顯示濃度在125～200MGL的DBP劑量暴露對PC12細胞株處理24～96小時，對PC12細胞生長存在顯著的抑制作用，并呈劑量－效應關系。PC12細胞暴露于DBP48小時，LDH釋放增多；GSHPX活性降低，MDA含量增高；DNA凝膠電泳結果顯示處理組出現(xiàn)明顯的“DNALADDER”。DBP在125MGL時凋亡相關基因均有相關表達，其中P53基因表達增加，BAX基因表達增高，BCL2基因表達降低，且與DBP暴露呈劑量相關關系。2流行病學研究重慶市婦幼保健院兒童保健科搜集病例及對照共120例病例24人，對照96人。男童17組，占708％；女童7組，占292％；性別比例為243∶1。病例組和對照組平均年齡分別為275±115和275±113歲。經(jīng)均衡性檢驗，病例組和對照組性別、年齡分布差別均無統(tǒng)計學意義，均衡性良好。單因素LOGISTIC回歸分析結果顯示，與行為認知發(fā)育相關的因素有魚類、大蒜、土豆、豆奶、蘋果、梨子、黑木耳、金針菇、銀耳、海帶、紫菜、兒童患哮喘、母親鍛煉習慣、母親洗澡淋浴時間、母親染料接觸史、父親食欲下降。與兒童行為認知發(fā)育無關的因素有飲水區(qū)域、性別、民族、父母親職業(yè)、父母親文化程度、家庭居住條件，兒童年齡、出生身長、現(xiàn)身長、出生體重、現(xiàn)體重、兒童好動性、易分心、易忘記任務、易感冒、易患牙齦炎及先天性疾病等因素，其他營養(yǎng)及飲食特征，母親其他生活習慣及環(huán)境暴露史，母親其他既往史，父親健康相關狀況，兒童免疫學相關指標血清IGA，溶菌酶、性激素水平，雌激素之雌二醇，雄激素之睪酮，血鉛水平。多因素條件LOGISTIC回歸分析結果顯示，按照值大小排列如下，母乳喂養(yǎng)時間0385，95％CI0167～0890，母親鍛煉習慣0293，95％CI0133～0648，母親洗澡淋浴時間85769，95％CI4161～1767867，大蒜0138，95％CI0021～0893，黑木耳0009，95％CI0000～0324，梨子0007，95％CI0000～0212，兒童患哮喘865931，95％CI10363～72356316，紫菜293732，95％CI7177～12020984，金針菇17612，95％CI1839～168679。其中以兒童患哮喘與兒童行為認知發(fā)育異常的關聯(lián)最大；母乳喂養(yǎng)期越長，兒童行為認知發(fā)育異常的危險性越低；母親良好的鍛煉習慣同樣是保護性因素；母親更長的洗澡淋浴時間則是兒童行為認知發(fā)育的危險性因素；大蒜、梨子、黑木耳的食用是兒童行為認知發(fā)育的保護性因素；而金針菇和紫菜的食用是兒童行為認知發(fā)育的危險性因素。通過氣相色譜－質(zhì)譜分析和原子吸收光譜法檢測，病例組和對照組兒童的食物、飲水、空氣中持久性毒物檢測結果不存在統(tǒng)計學差異。結論1實驗室研究結論1采用多劑量鄰苯二甲酸二丁酯對類神經(jīng)細胞PC12細胞進行細胞毒性實驗，通過臺盼藍染色，CCK8細胞增殖檢測實驗，細胞生長曲線等方法的檢測，發(fā)現(xiàn)鄰苯二甲酸二丁酯濃度達125MGL時即對PC12細胞產(chǎn)生細胞生長活性明顯下降，并且呈劑量相關關系。2通過乳酸脫氫酶釋放實驗，觀察乳酸脫氫酶在細胞上清液中的釋放濃度，發(fā)現(xiàn)一定劑量鄰苯二甲酸二丁酯暴露導致PC12細胞乳酸脫氫酶釋放增多，并且呈對數(shù)相關關系，提示細胞膜損傷作用的存在。3通過谷胱甘肽過氧化物酶活性和丙二醛含量檢測實驗，觀察在細胞上清液中谷胱甘肽過氧化物酶活性變化以及丙二醛含量的檢測，發(fā)現(xiàn)一定劑量鄰苯二甲酸二丁酯暴露導致PC12細胞的谷胱甘肽過氧化物酶活性降低，并且呈指數(shù)相關關系；鄰苯二甲酸二丁酯暴露導致PC12細胞的丙二醛含量增多，并且呈對數(shù)相關關系。提示其誘導細胞脂質(zhì)過氧化，干擾活性氧的平衡，誘發(fā)氧化應激。4通過細胞DNA電泳實驗，在DNA水平觀察DNALADDER的電泳結果，發(fā)現(xiàn)對照組及5MGL組鄰苯二甲酸二丁酯暴露未促進PC12細胞凋亡發(fā)生，而125MGL及更高濃度組鄰苯二甲酸二丁酯暴露出現(xiàn)典型DNALADDER出現(xiàn)，即促進PC12細胞凋亡發(fā)生。5通過RTPCR實驗，觀察不同劑量DBP對細胞的凋亡家族相關基因表達水平，對PC12細胞擴增P53，BAX，BCL2基因，發(fā)現(xiàn)其表達為上調(diào)P53和BAX，下調(diào)BCL2。說明其凋亡作用的實現(xiàn)與凋亡家族相關基因P53，BAX，BCL2表達水平調(diào)節(jié)相關。2流行病學研究結論通過流行病學病例對照研究，對120名兒童進行有關流行病學調(diào)查，GESELL量表發(fā)育測試，免疫功能指標檢測，性激素水平測定，血鉛濃度測定，以及10％兒童外環(huán)境中采用氣相色譜－質(zhì)譜分析以及原子吸收光譜分析對食物、飲水、空氣的相關持久性毒物濃度測定，分析結果如下1發(fā)現(xiàn)兒童行為認知發(fā)育與母乳喂養(yǎng)時間，大蒜，梨子，黑木耳，金針菇，紫菜，兒童患哮喘，母親鍛煉習慣，母親洗澡淋浴時間有關，與飲水區(qū)域無關。2兒童外環(huán)境暴露的抽樣觀察中，鄰苯二甲酸二丁酯及重金屬鉛的污染水平較低，其中食物中未檢出鄰苯二甲酸二丁酯，空氣和飲水中均檢出鄰苯二甲酸二丁酯，但水平很低，分別是0005～43ΜGL水和0004～013ΜGL空氣?？諝夂惋嬎畼颖镜臋z出水平在地區(qū)分布上存在一致性的趨勢，通過城區(qū)采樣點模擬地圖觀察分析，交通發(fā)達地區(qū)檢出水平較高。未觀察到病例組和對照組兒童的食物、飲水、空氣中持久性毒物的濃度存在統(tǒng)計學差異?？傊?，本文以重慶婦幼保健院2～5歲兒童為研究對象，觀察與兒童行為認知發(fā)育損傷的相關因素，為國內(nèi)后續(xù)相關研究提供有力的科學依據(jù)。

簡介：目的通過腺病毒介導TGFΒ1基因轉染兔骺板軟骨細胞EPIPHYSEALCHONDROCYTES，ECS，觀察TGFΒ1的表達及ECS合成和分泌軟骨基質(zhì)的情況，為構建新型的組織工程骺板軟骨提供實驗依據(jù)。方法⑴利用3周齡新西蘭大白兔股骨遠端骺板軟骨，分離出ECS并傳代培養(yǎng)，觀察ECS生長情況并鑒定。選用第3代ECS進入下一步基因轉染。⑵構建攜帶TGFΒ1基因的腺病毒載體。⑶分3組進行轉染分別為TGFΒ1載體組、空載體組和空白組。轉染后在倒置顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)以及增殖情況；并在熒光顯微鏡下觀察各組病毒轉染情況，同時計算轉染效率。利用MTT法檢測重組腺病毒轉染后的ECS增殖能力是否有明顯變化。應用ELISA法檢測轉染后收集到的各組培養(yǎng)液中的TGFΒ1濃度。應用Ⅱ型膠原免疫熒光評價轉染后細胞的成軟骨能力。采用RTPCR檢測各組細胞TGFΒ1MRNA的表達情況，并用WESTERNBLOT檢測各組細胞Ⅱ型膠原和TGFΒ1蛋白表達情況。結果①成功的從兔骺板軟骨中分離出ECS，并進行了傳代培養(yǎng)及鑒定。②在熒光顯微鏡下觀察各組轉染后細胞，發(fā)現(xiàn)TGFΒ1載體組和空載體組有較多熒光細胞出現(xiàn)，而空白組始終沒有出現(xiàn)熒光細胞，細胞轉染成功。通過MTT法檢測證明，腺病毒介導TGFΒ1基因轉染后的ECS的增殖能力短期內(nèi)沒有影響。③轉染14D后，TGFΒ1載體組免疫熒光觀察到Ⅱ型膠原較對照組明顯增強。④RTPCR檢測發(fā)現(xiàn)轉染組標本中TGFΒ1MRNA的表達較對照組明顯增強。4、WESTERNBLOT結果顯示轉染組中COLLAGENⅡ和TGFΒ1表達也明顯增強。結論⑴成功的從兔骺板軟骨中分離出ECS，并進行了傳代培養(yǎng)及鑒定，證實了第3代ECS表型穩(wěn)定，骺板軟骨細胞的生物學及功能學特性表達良好。⑵成功的構建了攜帶TGFΒ1基因的重組腺病毒載體，并運用重組腺病毒載體成功轉染ECS，且轉染率高，對細胞毒性小。⑶利用基因轉染技術將TGFΒ1基因轉染至ECS，可增強ECS合成和分泌軟骨基質(zhì)。

簡介：乙型肝炎病毒HBV的宮內(nèi)感染是中國HBV攜帶者和慢性乙型肝炎發(fā)生的重要原因胎兒期的HBV感染不僅易形成以后的慢性攜帶狀態(tài)而且是肝硬化和肝癌HCC的高危因素迄今為止有關HBV宮內(nèi)感染的確切定義尚不十分一致新生兒出生時外周血查出HBV血清標志物和HBVDNA可為宮內(nèi)感染亦可為宮內(nèi)傳播以往對HBV宮內(nèi)感染的研究包括感染源、感染途徑和機制、高危因素、感染時間、發(fā)生率、以及預防、診斷、治療、預后等多個方面普遍認為宮內(nèi)傳播是病毒透過胎盤屏障而發(fā)生有人提出了血液途徑、細胞途徑及外周血單個核細胞PBMC途徑等可能的機制該研究通過定量檢測不同孕齡孕婦及胎兒血液、細胞、組織的HBV標志物探討HBV宮內(nèi)傳播與感染的關系、臍血檢測診斷宮內(nèi)感染的可靠性、孕婦外周血病毒載量與宮內(nèi)感染量化關系及PBMC在宮內(nèi)感染的可能作用

簡介：乙型肝炎病毒HBV感染是世界范圍的嚴重公共衛(wèi)生問題之一，但是目前沒有特效防治方法，存在的關鍵問題在于HBV基因組較小，易發(fā)生突變，限制了靶向病毒的抗病毒藥物的發(fā)展。最近的研究表明，抑制宿主細胞中某些蛋白的功能可以阻斷病毒感染。與病毒基因組相比，人類基因組序列中可能包括更多與病毒復制有關的基因。應用DNA微陣列芯片技術系統(tǒng)分析宿主基因表達，是一種從宿主細胞中發(fā)現(xiàn)潛在抗病毒靶標的有效方法。因此，本課題旨在應用基因芯片技術篩選和驗證宿主細胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標，為新型抗病毒藥物的篩選奠定基礎。本研究利用人類全基因組芯片比較了HEPG2215細胞與HEPG2細胞表達譜差異，并研究了HEPG2215細胞經(jīng)抗HBV藥物干預前后細胞基因表達譜變化情況，篩選出在HBV感染后差異表達、而藥物干預后表達逆轉的基因，獲得了可能的HBV感染關鍵分子。通過RTPCR、WESTERN印跡技術驗證以及生物信息學分析發(fā)現(xiàn)ABHD2、EREG、ACVR2B、CDC34、KHDRBS3、RA可能成為肝細胞內(nèi)潛在的抗HBV藥物作用靶標。在此基礎上，應用反義技術等途徑抑制肝細胞中上述基因的表達或功能，發(fā)現(xiàn)只有當ABHD2、EREG的表達受到抑制時，HEPG2215細胞內(nèi)HBV的復制才受到明顯抑制，為證明ABHD2和EREG成為抗HBV藥物作用靶點的可能性提供了有力證據(jù)。由于多靶點聯(lián)合治療已逐漸成為抗乙型肝炎病毒治療中的熱點，在前期工作的基礎上將以前篩選出的抗HBV感染的作用靶標ASGPR、FIBRONECTIN、ABHD2、EREG分別與臨床常用的抗HBV藥物拉米夫定聯(lián)合用藥，從而篩選出組合作用較好的聯(lián)合用藥組，為臨床聯(lián)合抗病毒治療提供了新的思路和依據(jù)。綜上所述，本研究通過篩選和初步驗證確定ABHD2、EREG可能成為抗HBV藥物的新型作用靶點，且已篩選出的靶點中，ASGPR、FIBRONECTIN、EREG與拉米夫定聯(lián)合用藥后對IIBV的抑制呈現(xiàn)很好的協(xié)同作用。

簡介：本文對我國保存的H3N2亞型流感毒株進行系統(tǒng)的序列測定和分析。以闡明我國H3N2亞型流感HA1基因變異特征，比較中國流行毒株與WHO每年推薦疫苗株的相關性。首先，整理國家流感中心歷年來保留的毒種和相應的毒株背景信息記錄，建立毒株數(shù)據(jù)庫。為了全面代表中國流行毒株特征，按以下原則選取毒株，每年按照毒株分離的省區(qū)不同，選取不同分離月份的毒株進行測序。有些年代毒株數(shù)量少于10個，全部測序。毒株依據(jù)原傳代史用雞胚或細胞復蘇。提取核酸后用RTPCR方法擴增HA1基因片段。對PCR產(chǎn)物進行序列測定。采用CLASTALX進行序列的多重比對，使用BIOEDIT進行序列的差異分析，使用MEGAVERSION31軟件繪制基因種系發(fā)生樹，并進行核苷酸和氨基酸的變異速率和距離分析。將我國每年的H3N2序列代表株與WHO推薦的疫苗株進行序列比較分析。共整理1956～2005年的國家流感中心保存的流感病毒11232株，其中H3N2亞型病毒5537株，按選取原則，選取H3N2病毒進行HA1基因擴增，成功測序732株。分析結果如下1從中國歷年病毒與1968年病毒的距離可以看出，H3N2亞型流感病毒在中國各地區(qū)的進化是按時間先后進行的。H3N2流行的高峰期全國各地區(qū)的序列一致性較強。在H3N2流行的間期病毒序列間差異較大。2H3N2亞型流感病毒HAL區(qū)核苷酸和氨基酸的進化樹均呈典型的階梯形，以單一主干向上發(fā)展，樹的側枝很短，主干很長，顯示出新舊毒株的更替很快。HA1的核苷酸進化樹與氨基酸進化樹相比有更多的分支，氨基酸樹比核苷酸樹分支分組更為明顯。3中國1989～1990年、1992～1993年和1998～1999年的流行期北方分離的病毒比南方分離病毒更遠，推測這三次H3N2流行是從中國南方傳到北方。而1995～1996年和2000～2004年沒有明顯的南北方距離差異。4中國1968～1990年間測序毒株HA1序列結合NCBI下載的HA1序列，通過與1968年病毒距離得出變異速率，結果表明1968～1978年病毒HA的變異速率高于1979～1990年。通過與1980年病毒的距離，算出中國1980～2005年間H3N2亞型流感病毒的HAL區(qū)的核苷酸變異速率為4710SUBSTITUTIONSYEAR，推導的氨基酸的變異速率為6110REPLACEMENTSYEAR。5高變的位點和穩(wěn)定變化的位點多是已知的抗原位點及其附近的位點。受體結合位點在1992年后變異的速率比1992年前更快，尤其是220環(huán)區(qū)及附近。HA1區(qū)1968年有6個潛在糖基化位點，其中5個維持不變，到1999年逐漸增加到11個后到2005年沒有改變，其改變與流行相關。H3N2亞型流感病毒HA1的氨基酸位點每年變異的幅度不同，有的年位點多，有的年少。6通過HA1序列資料分析發(fā)現(xiàn)導致H3N2流行的三種方式，第一種是同時出現(xiàn)多位點變化，第二種是位點變化逐漸發(fā)生累積到多個位點變化，第三種是單個抗原位點和受體結合位點同時改變。7從HA1序列上看中國流行H3N2亞型毒株與WHO推薦的多株疫苗不匹配，疫苗株處于滯后狀態(tài)。本研究分析整理并測定了19682005年間H3N2流感病毒732株，通過序列分析發(fā)現(xiàn)HA1序列是按時間進化的，H3N2病毒在流行的前10年變異的速度較快。通過對變異位點的分析，發(fā)現(xiàn)抗原位點的不斷變化，受體結合位點的變異和潛在糖基化位點的改變共同促進HA的進化，引起H3N2亞型流感的新流行。同時出現(xiàn)多位點變化，逐漸發(fā)生累積到多個位點變化，單個抗原位點和受體結合位點同時改變?nèi)N變異方式均可引起H3N2新的流行。將WHO推薦的疫苗株與中國每年流行毒株的HA1序列進行比較，有多株疫苗株比中國的流行株要滯后。本文首次對我國的H3N2的歷史毒株進行系統(tǒng)研究，為H3N2的HA1基因的未來變異研究提供一定的依據(jù)。

簡介：乙型腦炎是由乙型腦炎病毒JEV感染所引起的一種危害嚴重的蟲媒性人畜共患病。該病毒主要經(jīng)過擴增宿主豬和媒介昆蟲蚊子進行傳播。豬是其主要的擴增宿主和傳染源。感染后可引起母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎及公豬發(fā)生睪丸炎，不僅給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟損失，而且還嚴重威脅著人類健康。臨床準確診斷是有效防控該病的重要途徑。但由于傳統(tǒng)的病毒分離鑒定方法操作復雜、難度大、周期長，而RTPCR等分子生物學方法雖然敏感，但操作技術要求高、需要特殊儀器設備、且易出現(xiàn)假陽性，因此，簡便、準確、快速的抗原檢測方法顯得尤為迫切。本研究利用乙型腦炎病毒單克隆抗體和多克隆抗體，建立了可用于檢測豬、人和蚊子等多種臨床樣品中乙型腦炎抗原的雙抗體夾心ELISA方法，并制備了試劑盒，為乙型腦炎的臨床快速診斷提供了有效工具。具體研究內(nèi)容如下1JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的建立本研究制備了兔源乙型腦炎病毒多克隆抗體。在此基礎上，以已經(jīng)獲得的JEVE蛋白單克隆抗體作為一抗包被酶標板，兔源JEV多克隆抗體作為二抗，再加入辣根過氧化物酶標記的羊抗兔抗體與二抗反應，并通過催化底物顯色以檢測樣品中是否含有JEV抗原。經(jīng)過方陣滴定，確定了一抗的最佳包被濃度為5ΜGML，二抗和辣根標記抗體的最佳稀釋度分別為110000和130000。敏感性試驗表明，該方法的敏感性可達到104PFUML，并且該方法不與其它常見的豬流行病病毒發(fā)生交叉反應，對5份樣品進行重復性檢驗的變異系數(shù)分別為760、670、670、760、440，均小于10，將包被的酶標板置于37℃連續(xù)5天，標準陰陽性對照的OD值均沒有發(fā)生明顯變化。以上結果說明，本研究所建立的JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法具有敏感性高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點。2JEV雙抗體夾心ELISA抗原檢測方法的臨床初步應用分別用RTPCR方法和制備的雙抗體夾心ELISA試劑盒對60份臨床樣品進行檢測包括16份人腦脊液樣品、20份蚊子樣品、24份豬腦樣品，并將二者檢測結果進行對比。結果表明與RTPCR方法相比，JEV雙抗體夾心ELISA檢測方法的陽性符合率為70，陰性符合率為100，總符合率可達到90。說明本研究建立的JEVELISA抗原檢測方法與RTPCR方法具有較高的符合率，可以作為JEV臨床快速檢測的有效工具。